產(chǎn)脂肪酶微生物的篩選及鈣對(duì)其發(fā)酵產(chǎn)酶與酶學(xué)性質(zhì)的影響.pdf

1、微生物脂肪酶作為一種重要的工業(yè)用酶，已經(jīng)在工業(yè)中得到越來(lái)越廣泛的應(yīng)用；關(guān)于如何提高脂肪酶的產(chǎn)量和穩(wěn)定性的研究一直以來(lái)都是國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。 從自然界中篩選得到一株產(chǎn)脂肪酶的微生物，通過(guò)形態(tài)、生理生化和16SrDNA鑒定，確定其為不動(dòng)桿菌屬，定名為Acinetobactersp.SYBCLi-2。 采用硫酸銨沉淀和雙水相萃取的方法分離純化了SYBCLi-2脂肪酶。SYBCLi-2脂肪酶粗酶最終純化了8.64倍，回收率為38

2、.97％。經(jīng)過(guò)SDS-PAGE電泳驗(yàn)證，SYBCLi-2脂肪酶只有一個(gè)亞基，分子量約為24.5kDa。 SYBCLi-2脂肪酶是金屬結(jié)合酶，鈣離子對(duì)脂肪酶有明顯的激活作用，5mmol/L時(shí)可使酶活增加39.1％，但鈣離子不是酶蛋白的活性必需因子。 SYBCLi-2脂肪酶在40℃、50℃環(huán)境中穩(wěn)定，在60℃的環(huán)境中不穩(wěn)定，1h后下降到原酶活的43％。SYBCLi-2脂肪酶在pH7.0-9.0的范圍內(nèi)均表現(xiàn)比較穩(wěn)定，且在pH

3、8.0附近表現(xiàn)十分穩(wěn)定。在pH5.0的孵育條件下，24h后酶活有損失較大，殘余50％左右的酶活。5mmol/L的CaCl2的加入對(duì)SYBCLi-2脂肪酶的熱穩(wěn)定性有了一定改善，在60℃的孵育條件下，1h后酶活可保留68％左右，對(duì)照的酶活下降到原酶活的43％。但是5mmol/L的CaCl2的加入對(duì)SYBCLi-2脂肪酶的pH穩(wěn)定性幾乎沒(méi)有影響。 在產(chǎn)酶發(fā)酵過(guò)程初始添加鈣離子、鑭離子和三氟拉嗪，發(fā)現(xiàn)鈣離子對(duì)產(chǎn)酶酶活的影響作用都要大于