2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、廣西大學(xué)博士學(xué)位論文康氏木霉AS3.2774纖維素酶系的誘導(dǎo)、阻遏、純化及鑒定研究姓名:林元山申請學(xué)位級別:博士專業(yè):微生物學(xué)指導(dǎo)教師:梁智群20101205和菌體形態(tài)分化差異。其中,在誘導(dǎo)培養(yǎng)基Ⅳ中,菌絲體比重較大且飽滿壯實,孢子比重較小,生物量較少,纖維素酶產(chǎn)物比生產(chǎn)率較快;在一般性誘導(dǎo)培養(yǎng)基Ⅲ中,菌絲體比重較小且易衰竭,孢子比重較大,生物量較多,纖維素酶產(chǎn)物比生產(chǎn)率較慢;康氏木霉在阻遏培養(yǎng)基V 發(fā)酵過程中,出現(xiàn)兩次產(chǎn)物比生產(chǎn)率的增

2、速過程,但幅度比誘導(dǎo)培養(yǎng)基低,體現(xiàn)阻遏解除的機制。6 、康氏木霉A S 3 .2 7 7 4 的纖維素酶的代謝調(diào)控實質(zhì)基因水平的誘導(dǎo)與阻遏,是纖維素酶蛋白在合成“量’’上的調(diào)節(jié),二者胞外蛋白差異十分顯著,其中被誘導(dǎo)的纖維素酶胞外蛋白是被阻遏的纖維素酶胞外蛋白的3 8 倍以上,體現(xiàn)康氏木霉優(yōu)先利用現(xiàn)有資源的進化機制。7 、論文研究了“聚丙烯酰胺凝膠活性電泳電洗脫二步循環(huán)法“ 分離康氏木霉纖維素酶系的條件,獲得有別于S c h 丟i g g

3、 e r 和O f f o r d 的電泳方案的最優(yōu)條件為:分離膠梯度4 %- 8 %;膠長1 8 0 m m ;濃縮膠電壓,8 0 - 1 0 0 V ,電流2 ∞0 m A ;分離膠電壓1 8 0 - 2 0 0V , 電流< 3 0 m A = 電泳緩沖液離子濃度,1 2 .5 m m o l /L T r i s —g l y c i n9 6m m o l /L ,電泳時間為1 0 —1 2h ,4 。C 環(huán)境條件操作。

4、8 、通過對纖維素酶系的分離純化研究,提出了“聚丙烯酰胺凝膠活性電泳電洗脫二步循環(huán)法”分離純化纖維素酶的新方案,包括:( 1 ) 第一次電泳,即4 %- 8 %梯度膠電泳分離;( 2 ) 分區(qū)染色;( 3 ) 膠內(nèi)蛋白定位;( 4 ) 切膠分類蛋白;( 5 ) 電洗脫回收蛋白;( 6 ) 透析脫鹽、凍干;( 7 ) 第二次電泳,即均一膠活性電泳,均一膠濃度由目的蛋白在第一次電泳膠的遷移率決定,分離程序進行至第二次透析脫鹽、凍干時結(jié)束。經(jīng)

5、分離純化獲得9 個單一組分,各組分的純化效果基本一致。其中,活性蛋白P s ( 1 3 _ 葡萄糖苷酶)在第一次活性電泳分離時,純化倍數(shù)為1 7 倍,回收率為1 0 .6 %;在第二次活性電泳分離時,純化倍數(shù)為2 4 倍,回收率為5 .5 %,比活力達9 9 4 .6I U /( m gp r o t e i n ) ,在整個純化完成后,最后獲得8I J g 電泳純的p 葡萄糖苷酶。9 、康氏木霉纖維素酶系組分經(jīng)生物學(xué)功能測定,組分P

6、1 無p 葡萄糖苷酶活性、外切葡聚糖酶活性、內(nèi)切葡聚糖酶活性。與纖維素酶系其它組分同時被誘導(dǎo)與阻遏調(diào)控,屬于纖維素酶系,功能未知;P 3 為1 3 葡萄糖酶;P 4 、P l o 為外切葡聚糖酶;P s 、P s 、P 7 為內(nèi)切葡聚糖酶;P 2 、P s 纖維素酶活性較弱,屬于纖維素酶系;P 9 基本無纖維素酶活性,不能與纖維素酶系其它組分同時被誘導(dǎo)、被阻遏調(diào)控,不屬于康氏木霉纖維素酶系。經(jīng)胰蛋白酶酶切、基質(zhì)輔助激光解吸,電離飛行時間

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