2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、本研究以廈門樹白蟻為材料,經(jīng)PBS緩沖液(pH6.7)勻漿抽提處理、硫酸銨分級分離獲得白蟻纖維素酶(Endo-1,4-β-D-Glucanase,EC3.2.1.4,簡稱EGase)粗酶。進一步經(jīng)DEAE-Sepharose FastFlow陰離子交換柱層析、Shephadex G-100凝膠過濾柱層析等純化,得到比活力為458.7 U/mg的電泳單一純的酶制劑,測定該酶的分子量約為44.8kD,等電點(pI)為6.1,酶的紫外吸收峰在

2、278 nm,熒光發(fā)射峰在334nm。 ⑴該酶水解羧甲基纖維素鈉的最適pH值為5.0,最適溫度40℃,米氏常數(shù)Km值為7.197mg/ml,Vm為0.774.mmol/(Lmin)(pH5.0,40℃)。酶的熱穩(wěn)定性研究表明:該酶在pH4.6~9.0和在溫度低于45℃下穩(wěn)定。 ⑵化學(xué)修飾劑:溴代乙酸(BrAc)、N-溴代丁二酰亞胺(NBS)、碳化二亞胺、醋酸酐、對氯汞苯甲酸(pCMB)、巰基乙醇(MT)、乙酰丙酮、過

3、氧化氫(H2O2)、苯甲基磺酰氟(PMSF),對酶修飾研究結(jié)果表明:瞇唑基、吲哚基、羧基和氨基是該酶的活性功能基團,而蛋白質(zhì)分子中巰基、二硫鍵、胍基、硫醚基和羥基與酶活力無關(guān)。溴代乙酸(BrAc),NBS,醋酸酐的抑制機理表現(xiàn)為非競爭性類型抑制常數(shù)分別為42.8mmol/L、83.1mmol/L和16.5 mmol/L。 ⑶金屬離子對酶活力的影響:結(jié)果表明鹵素陰離子(Cl-,Br-,r-),堿金屬離子(Li+,Na+,K+)對

4、酶活力也沒有影響。Ca2+,Zn2+,Mn2+對EGase具有明顯的激活作用,重金屬離子Cu2+,pb2+,Hg2+對酶具有不可逆抑制作用。 ⑷有機溶劑對酶活力的影響:甲醇、乙醇和丙醇這三種一元醇對酶均表現(xiàn)為抑制的作用,抑制強度依次是甲醇>丙醇>乙醇。乙二醇、丙二醇和丙三醇對酶也都具有強烈的抑制作用,其半抑制濃度(IC50)分別為3.8%、14.5%和16.2%。其中乙二醇的抑制作用是可逆過程,其抑制常數(shù)(KI)為3.8%。苯

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