中國(guó)石蒜屬lycorisherb.種間親緣關(guān)系與居群分子標(biāo)記研究

1、南京農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文中國(guó)石蒜屬（Lycoris Herb.）種間親緣關(guān)系與居群分子標(biāo)記研究姓名：袁菊紅申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：觀賞園藝指導(dǎo)教師：夏冰;孫視20071001中國(guó)石蒜屬C L y c o r 蠡H e r b ．) 種問(wèn)親緣關(guān)系與居群分子標(biāo)記研究標(biāo)．2 ．利用高效液相色譜( H P L C ) 對(duì)我國(guó)石蒜屬1 3 種1 變種及其近緣植物中國(guó)水仙生物堿進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)生物堿成分的相似性采用Q 聚類，石蒜屬物種聚成兩大類，該屬

2、大多數(shù)種的歸類與基于形態(tài)特征的數(shù)量分類結(jié)果一致，但紅藍(lán)石蒜和忽地笑的聚類發(fā)生了變化．中國(guó)水仙的H P L C 圖譜與石蒜屬植物明顯有別，單獨(dú)成一類．外形相似的中國(guó)石蒜與忽地笑，石蒜與矮小石蒜的H P L C 圖譜差異也較大．3 ．采用P C R 產(chǎn)物直接測(cè)序法，測(cè)定了我國(guó)石蒜屬1 3 種2 變種的葉綠體D N At r n L - F 序列，以中國(guó)水仙為外類群．結(jié)果表明：所測(cè)物種的序列全長(zhǎng)在9 0 5 —1 0 3 6 b p之間，經(jīng)排

3、序后兩端切平，得到8 8 6 b p 的整齊序列，其中t r n L ( U 從) 內(nèi)含子長(zhǎng)度為5 2 9 b p ，t r n L ( U A A ) 3 ’外顯子至t r n F ( G A A ) 之間的基因間區(qū)長(zhǎng)度為3 5 7 b p ．所測(cè)物種的變異位點(diǎn)1 4 個(gè)，信息位點(diǎn)1 0 個(gè)，占序列總長(zhǎng)度1 ．1 3 ％，序列的G + C 含量為3 2 ．9 ％．序列中出現(xiàn)4 個(gè)堿基“A T A T “ 缺失／插入和7 個(gè)堿基的置換(

4、 顛換6 個(gè)，轉(zhuǎn)換1 個(gè)) ，用以區(qū)別石蒜屬與其近緣植物水仙；t r n L - F 序列的1 7 7 b p 處和4 9 7 b p 處分別是香石蒜和矮小石蒜種特異性鑒別位點(diǎn)．基于t r n L - F 序列運(yùn)用最大簡(jiǎn)約法獲得供試樣品的分子系統(tǒng)樹(shù)：水仙屬植物形成一個(gè)單系類群；石蒜屬1 3 種2 變種可分為3 類，多數(shù)種的歸類與經(jīng)典分類結(jié)果基本一致．結(jié)果還表明換錦花很可能作為紅藍(lán)石蒜、玫瑰石蒜的雜交母本；安徽石蒜可能是長(zhǎng)筒石蒜的變種或以

5、長(zhǎng)筒石蒜為母本的雜交種．對(duì)石蒜1 3 個(gè)居群和其變種矮小石蒜、近緣種玫瑰石蒜和紅藍(lán)石蒜的t r n L - F 序列也進(jìn)行測(cè)定分析，結(jié)果表明：所測(cè)樣品加L F 序列存在一定變異，堿基突變以轉(zhuǎn)換為主．石蒜種內(nèi)不同居群( 細(xì)葉型和寬葉型) t r n L - F 序列呈現(xiàn)一定差異，江蘇江寧的石蒜居群t r n L - F 序列與玫瑰石蒜、紅藍(lán)石蒜的完全相同．4 ．采用簡(jiǎn)單重復(fù)序列間區(qū)( I S S R ) 分子標(biāo)記，研究了中國(guó)原產(chǎn)的石蒜屬1

6、 3 種1變種之間親緣關(guān)系，以中國(guó)水仙為外類群．1 6 個(gè)擴(kuò)增清晰、多態(tài)性好的I S S R 引物共擴(kuò)增出2 5 3 個(gè)位點(diǎn)，其中2 4 4 個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)，多態(tài)性位點(diǎn)百分率達(dá)9 6 ．4 4 ％．種間遺傳距離以江蘇石蒜與中國(guó)水仙的的最遠(yuǎn)，達(dá)0 ．8 7 0 0 ，石蒜與矮小石蒜遺傳距離最近，為0 ．2 1 0 4 ．中國(guó)石蒜與忽地笑雖然花部性狀極為相似，但D N A 差異較大．U P G M A法將供試石蒜物種聚成2 大類，除換錦花、鹿