利用ISSR及SRAP分子標(biāo)記研究菜用大黃與藥用大黃的親緣關(guān)系.pdf

1、菜用大黃（Rheum rhaponticum L.）屬于多年生草本植物，其葉柄粗壯多汁，富含纖維素A、維生素C、鈣、磷以及琥珀酸等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，是理想的保健蔬菜，在歐洲、北美和大洋洲地區(qū)大面積用于商業(yè)栽培。十七世紀(jì)，中國(guó)藥用大黃被引進(jìn)至歐洲后經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期的自然進(jìn)化演變?yōu)椴擞么簏S，然而關(guān)于菜用大黃與藥用大黃親緣關(guān)系未見(jiàn)報(bào)道。本研究對(duì)22份大黃品種（6份菜用大黃和16份藥用大黃）進(jìn)行了種子形態(tài)學(xué)觀測(cè)和ISSR及SRAP分子標(biāo)記分析。通過(guò)菜用大黃IS

2、SR-PCR反應(yīng)體系的優(yōu)化及驗(yàn)證、ISSR及SRAP標(biāo)記引物的篩選、親緣關(guān)系分析等研究，對(duì)菜用大黃和藥用大黃的親緣關(guān)系進(jìn)行了研究，并初步揭示菜用大黃的起源，為課題組今后的育種工作提供重要的理論依據(jù)。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴建立了菜用大黃ISSR-PCR最佳反應(yīng)體系。即10×PCR Buffer2.5μL，模板DNA125ng，Mg2+2.5mmol/L，dNTPs0.35mmol/L，引物0.5μmol/L，Taq DNA聚合

3、酶0.04U/μL，反應(yīng)體系的總體積為25μL。⑵通過(guò)對(duì)22個(gè)大黃品種的種子長(zhǎng)度、寬度、翅寬和千粒重四個(gè)形態(tài)指標(biāo)進(jìn)行測(cè)量，利用SAS v9.2軟件進(jìn)行聚類(lèi)分析。結(jié)果顯示當(dāng)最大距離為3.5時(shí)，可以將22份材料劃分為4類(lèi)，其中RT品種的種子在四個(gè)指標(biāo)上明顯與其他品種存在較大的差異。⑶利用菜用大黃品種R34和藥用大黃品種SC分別對(duì)100條ISSR引物和182對(duì)SRAP引物組合進(jìn)行篩選，共獲得多態(tài)性好，譜帶清晰，結(jié)果重復(fù)性高的ISSR引物13條

4、、SRAP引物組合32對(duì)。ISSR-PCR擴(kuò)增共獲得74個(gè)等位基因位點(diǎn)，其中59個(gè)是多態(tài)性位點(diǎn)；SRAP-PCR擴(kuò)增共計(jì)獲得227個(gè)條帶，其中206條具有多態(tài)性。結(jié)果表明這兩種分子標(biāo)記均能提供豐富的遺傳信息，均可用于大黃遺傳多樣性分析。⑷利用POPGENE1.32軟件對(duì)22份大黃品種進(jìn)行遺傳相似性和遺傳距離分析，ISSR-PCR分子標(biāo)記得出大黃各品種間的遺傳相似系數(shù)在0.3220-0.8983之間，遺傳距離在0.1072-0.9865之

5、間；其中，SC和YN遺傳相似性系數(shù)最大，說(shuō)明這兩者之間的親緣關(guān)系最近；土大黃和RG的相似性系數(shù)最小，表明這二者之間的親緣關(guān)系最遠(yuǎn)。SRAP-PCR分子標(biāo)記得出大黃品種間的遺傳相似性系數(shù)在0.3301-0.8495之間；其中，RG和RO遺傳相似性系數(shù)最大，說(shuō)明這兩者之間的親緣關(guān)系最近；南大黃和RO的相似性系數(shù)最小，表明這二者之間的親緣關(guān)系最遠(yuǎn)。⑸利用NTSYS pc2.10c軟件對(duì)22份大黃品種的親緣關(guān)系進(jìn)行聚類(lèi)分析，基于ISSR及SRA