建蘭亞屬植物種質(zhì)資源分子分類及親緣關(guān)系研究.pdf

1、為了加快蘭花的育種步伐,培育出優(yōu)質(zhì)的蘭花品種。本文對(duì)建蘭亞屬蘭花種質(zhì)資源的形態(tài)及葉綠素含量進(jìn)行比較分析,并利用RAPD、ERPAD、PCR-RFLP、ISSR、SRAP分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)建蘭亞屬植物資源進(jìn)行分子分類及親緣關(guān)系研究。
　　 主要研究結(jié)果如下:
　　 1.對(duì)建蘭亞屬21個(gè)蘭花品種的形態(tài)特征的觀察和分析可以看出,除葉脈序特征均為平行脈序(弧形脈),葉片均為紙質(zhì)外,不同品種間的一級(jí)與二級(jí)脈隨品種也不相同,所有品種在形

2、態(tài)上具一定的分化,表明其形態(tài)特征反映出不同品種間的相似性和差異性,從而為屬下種間的界限和關(guān)系的探討提供了重要的形態(tài)學(xué)證據(jù)。
　　 2.應(yīng)用SPAD-502葉綠素計(jì)和常規(guī)方法對(duì)21個(gè)建蘭亞屬蘭花品種的葉綠素含量進(jìn)行了比較分析。結(jié)果表明:大多數(shù)蘭花在種間或種內(nèi)的葉綠素a、葉綠素b、總?cè)~綠素含量以及SPAD值均有所不同,但他們之間表現(xiàn)出優(yōu)異的差異性；7個(gè)蘭花種間的葉綠素含量與其SPAD值的相關(guān)性均達(dá)到了顯著水平,表明利用SPAD值米衡

3、量其葉綠素含量的可行性；通過(guò)聚類分析可以把21個(gè)蘭花品種分為2大類群。
　　 3.應(yīng)用ERPAD(延長(zhǎng)隨機(jī)引物擴(kuò)增DNA)標(biāo)記對(duì)54個(gè)寒蘭品種進(jìn)行分析和鑒定。結(jié)果表明:8個(gè)多態(tài)性強(qiáng)引物的1個(gè)堿基延長(zhǎng),共擴(kuò)增出2959條帶,其中2527條帶(85.40％)具有多態(tài)性,延長(zhǎng)2個(gè)堿基引物ACTGAACGCCCG+ACTGAACGCCGG能獲得一條2.5Kb RAPD特異性片段,此片段在RAPD引物(ACTGAACGC)和延長(zhǎng)一個(gè)堿基的

4、(ACTGAACGCC+ACTGAACGCCC)引物具有相同的擴(kuò)增片段。在無(wú)需克隆和測(cè)序的條件下,這種標(biāo)記的穩(wěn)定性和特異性均接近SCAR標(biāo)記。通過(guò)聚類分析可以把54個(gè)寒蘭品種分為2大類群。
　　 4.應(yīng)用PCR-RFLP標(biāo)記對(duì)54個(gè)寒蘭品種的葉綠體和線粒體基因組進(jìn)行分析和鑒定。結(jié)果表明:在6個(gè)葉綠體基因組(cpDNA)的PCR-RFLP分析中,對(duì)4個(gè)(66.67％)可擴(kuò)增出條帶引物進(jìn)行12種限制性內(nèi)切酶消化,有19種(26.38

5、％)引物酶組合能檢測(cè)到116多態(tài)性帶紋。在6個(gè)線粒體基因組中(mtDNA)的PCR-RFLP分析中,利用12種限制性內(nèi)切酶對(duì)能擴(kuò)增出條帶的2種引物進(jìn)行消化后,只有一種引物(Cox1)能擴(kuò)增出55(53.49％)多態(tài)性帶紋。通過(guò)聚類分析可以把54個(gè)寒蘭品種分為4大類群。
　　 5.應(yīng)用ISSR標(biāo)記對(duì)54個(gè)寒蘭品種進(jìn)行分析和鑒定。結(jié)果表明:8個(gè)ISSR引物共擴(kuò)增出893條帶,每對(duì)引物擴(kuò)增條帶數(shù)為2-6條,平均為3.22。其中有224

6、個(gè)多態(tài)性條帶,占總帶數(shù)的24.72％,平均多態(tài)性條帶數(shù)為2.73。擴(kuò)增帶紋片段多在200bp-2000bp之間。通過(guò)聚類分析可以把21個(gè)蘭花品種分為6大類群。
　　 6.應(yīng)用 SRAP標(biāo)記對(duì)51個(gè)寒蘭品種的基因組DNA進(jìn)行分析。結(jié)果表明篩選出的11對(duì)SRAP引物組合對(duì)共擴(kuò)增出586條帶紋,其中504條為多態(tài)性(86.01％),平均每個(gè)引物擴(kuò)增46條多態(tài)性帶。聚類分析表明把51份材料根據(jù)起源和生物學(xué)特性劃分為中國(guó)寒蘭和日本寒蘭兩大