利用AFLP分子標記技術(shù)探討部分竹類植物屬間親緣關(guān)系.pdf

1、竹子是一種重要的經(jīng)濟作物，屬禾本科，是重要的森林資源。但由于分類標準不統(tǒng)一，分類手段的局限性，導致了分類結(jié)果的不一致。AFLP(Amplified Fragment LengthPolymorphism)分子標記具有高效、穩(wěn)定、可靠的特點，已廣泛應用于品種鑒定、遺傳多樣性分析等方面。本實驗利用AFLP 技術(shù)對35個竹子品種進行了多態(tài)性分析和聚類比較，旨在為竹子的分類地位提供必要的依據(jù)。研究結(jié)果如下：
　　 1、通過對植物基因組總

2、DNA的提取方法的比較和改進，得到了一種適合竹子總DNA 提取的方法——改良SDS法。運用該方法進行竹子葉片DNA的提取能提出適合AFLP 標記技術(shù)所需的高質(zhì)量DNA。
　　 2、通過對竹子AFLP 反應體系進行系統(tǒng)研究，建立了適于竹子AFLP分析的最佳體系。600ng DNA 用10U/μL的EcoR I和Mse I 在37℃ 3h，65℃ 3h的條件下進行雙酶切，然后加入10μL 連接混合液16℃連接過夜；預擴增取連接產(chǎn)物5

3、μL，EcoR I和MseI（20U/μL）各0.6μL，10倍buffer 2μL，dNTPs 2μL，ddH2O 補到20μL；取5μL 稀釋20倍后的預擴增產(chǎn)物,20U/μL EcoR I和Mse I 選擴引物各0.6μL，總體積20μL 進行選擇性擴增。在此優(yōu)化條件下，可以得到重復性好、穩(wěn)定性且多態(tài)性高的竹子AFLP條帶。
　　 3、篩選出10 對具多態(tài)性和清晰度都較高的引物組合用于材料分析。共擴增出可統(tǒng)計條帶872條，