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1、1一實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康?、學(xué)習(xí)離體小腸平滑肌灌流的實(shí)驗(yàn)方法;2、證明小腸平滑肌具有自動(dòng)節(jié)律性和緊張性活動(dòng),觀察若干刺激對(duì)離體小腸運(yùn)動(dòng)的影響。二實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理動(dòng)物的胃腸道由平滑肌組成,胃腸道平滑肌除具有肌肉的共性,如興奮性、傳導(dǎo)性和收縮性之外,尚有自己的特性,主要表現(xiàn)為緊張性和自動(dòng)節(jié)律性收縮,可以形成多種形式的運(yùn)動(dòng),主要有緊張性收縮,蠕動(dòng)。此外,胃還有明顯的容受性舒張,小腸還有分節(jié)運(yùn)動(dòng)及擺動(dòng)。如果將動(dòng)物的小腸平滑肌離體,放置在各種化學(xué)成分
2、、滲透壓、pH、溫度以及氣體供應(yīng)等因子十分接近機(jī)體的內(nèi)環(huán)境的溶液中時(shí),可保持離體小腸段長(zhǎng)時(shí)間地存活下來,并可以觀察到小腸平滑肌的自動(dòng)節(jié)律性、緊張收縮性、伸展性和對(duì)機(jī)械牽拉、溫度刺激、化學(xué)刺激十分敏感,而對(duì)電刺激和切割刺激不敏感等一系列特性。通常用臺(tái)式液做灌流液,將小腸的一端固定,另一端連張力換能器,即可通過一定的記錄裝置記錄下小腸肌的收縮曲線。三使用儀器、材料使用儀器、材料1、儀器:細(xì)線,注射器,恒溫平滑肌槽,計(jì)算機(jī)生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)
3、,張力換能器,萬(wàn)能支架,螺旋夾,雙凹夾,溫度計(jì),橡膠管,制氧機(jī)等。2、材料:臺(tái)氏液,1:5000腎上腺素,1:10000乙酰膽堿,1%CaCl2溶液,1molLHCl溶液,1molLNaOH溶液,阿托品等。四.實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟1、開啟恒溫平滑肌槽電源,使其恒溫工作點(diǎn)定在37攝氏度。2、猝死兔子,剪取23cm長(zhǎng)的十二指腸,用臺(tái)氏液漂洗,置于低溫臺(tái)氏液中備用。3、連接各種儀器,將小腸的兩端分別與標(biāo)本固定鉤和張力換能器連接,讓制氧機(jī)正常為臺(tái)氏
4、液供氧,進(jìn)入計(jì)算機(jī)生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)。4、先后觀察、記錄37攝氏度臺(tái)氏液中的腸段節(jié)律性收縮曲線,待中央標(biāo)本槽內(nèi)的臺(tái)氏液溫度穩(wěn)定在37攝氏度后,停氧1min記錄腸段節(jié)律性收縮曲線,恢復(fù)供氧,待臺(tái)氏液中的小腸穩(wěn)定后,分別換成22℃,45℃的臺(tái)氏液,記錄腸段節(jié)律性收縮曲線。再灌流37℃臺(tái)氏液待腸段活動(dòng)恢復(fù)后,依次滴加1molLNaOH溶液,1molLHCl溶液,1%CaCl2溶液1:5000腎上腺素,1:10000乙酰膽堿,阿托品觀察腸段收
5、縮曲線的改變。每次實(shí)驗(yàn)在觀察到明顯變化后,都應(yīng)用預(yù)先準(zhǔn)備好的37℃臺(tái)氏液沖洗3次。五實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析(1)缺氧對(duì)離體小腸活動(dòng)的影響)缺氧對(duì)離體小腸活動(dòng)的影響從圖一可以看出,正常情況下,離體家兔腸段收縮頻率為17次min收縮張力最小值為26.8g,最大值為35g。對(duì)浴槽內(nèi)的離體小腸停氧的瞬間可以看到基線明顯上移接著又下降回原來狀態(tài),其節(jié)律為16次min收縮張力最小值為23.7g,最大值為34.6g。張力:張力:g3圖三高溫對(duì)離
6、體小腸活動(dòng)的影響(12.5sDiv)分析:當(dāng)臺(tái)氏液溫度為45℃時(shí),腸段中酶活性提高,離子通道活性增強(qiáng),使得基線上移,幅度增加。腸管平滑肌對(duì)溫度改變極為敏感,也反映出酶對(duì)溫度的敏感。(4)(4)NaOHNaOH對(duì)離體小腸活動(dòng)的影響對(duì)離體小腸活動(dòng)的影響如圖四所示,正常情況下,小腸平滑肌收縮的節(jié)律為16次min,收縮張力最小為26.1g最大為47.1g,滴加入1滴1molmLNaOH后,可以明顯的看到基線上移后恢復(fù)回原水平,其節(jié)律為16次mi
7、n收縮張力最小為20g最大為60g其收縮強(qiáng)度增加,幅度增大。張力:張力:g圖四NaOH對(duì)離體小腸活動(dòng)的影響(12.5sDiv)分析:在加入NaOH溶液1滴后,可見小腸活動(dòng)加強(qiáng),幅度增加,基線上移。加入NaOH后,此時(shí)溶液的pH比較適合酶的活性作用,有利于小腸各種酶發(fā)揮作用,使小腸活動(dòng)加強(qiáng)。如果所加入的NaOH量過多,上述現(xiàn)象就不會(huì)出現(xiàn),因?yàn)槊傅幕钚允艿狡茐?。?)HClHCl對(duì)離體小腸活動(dòng)的影響對(duì)離體小腸活動(dòng)的影響如下圖五所示,正常情況
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