滋陰調(diào)經(jīng)顆粒的研制及其對大鼠離體子宮平滑肌收縮的影響.pdf

1、背景:
　　“滋陰調(diào)經(jīng)顆粒”原處方為廣東省中醫(yī)院黃健玲教授的經(jīng)驗方。該方由9種中藥組成，功能滋補肝腎，調(diào)經(jīng)止血，臨床上長期用于治療圍絕經(jīng)期功血取得了很好的療效。但滋陰調(diào)經(jīng)方傳統(tǒng)湯劑由于質(zhì)量不易控制，使用不便、服用量大等，使患者在治療時依從性差。本項研究受重慶市永川縣中醫(yī)院委托，將該方研制開發(fā)成為醫(yī)院制劑，以便更科學和廣泛的利用其醫(yī)療價值。本項研究得到了重慶市衛(wèi)生局中醫(yī)藥項目立項資助（滋陰調(diào)經(jīng)顆粒治療肝腎陰虛型圍絕經(jīng)期功血的臨床研究

2、2012-2-36號）。
　　目的:
　　本研究擬將滋陰調(diào)經(jīng)方中藥湯劑進行劑型改良，制成顆粒劑，以克服湯劑存在的缺點;對制成的顆粒劑進行質(zhì)量標準研究及穩(wěn)定性考察;并研究滋陰調(diào)經(jīng)顆粒對大鼠離體子宮平滑肌收縮的影響。
　　方法:
　　1.滋陰調(diào)經(jīng)顆粒的制備工藝研究(1)提取工藝的研究:采用水煎煮法對滋陰調(diào)經(jīng)方進行有效成分的提取。以浸膏得率、川續(xù)斷皂苷Ⅵ含量、二苯乙烯苷含量、總鞣質(zhì)含量、總皂苷含量及總黃酮含量為考察指標

3、，采用正交設(shè)計法對提取工藝進行優(yōu)化，以獲得優(yōu)化后的提取工藝。(2)純化工藝的研究:按優(yōu)化后的提取工藝提取后，采用醇沉法對提取物進行純化。以除雜率及有效成分川續(xù)斷皂苷Ⅵ、二苯乙烯苷、總鞣質(zhì)、總皂苷和總黃酮的保留率為考察指標，采用均勻設(shè)計法對醇沉工藝進行優(yōu)化，以獲得優(yōu)化后的醇沉工藝。(3)成型工藝研究:選擇合適的填充劑及其配比用量，以顆粒的顏色、成型性、均勻度、溶化性、口感等為指標，優(yōu)化成型工藝。
　　2.滋陰調(diào)經(jīng)顆粒的質(zhì)量標準研究(

4、1)性狀:觀察描述滋陰調(diào)經(jīng)顆粒的外觀、性狀、顏色和氣味等。(2)鑒別:采用TLC法對滋陰調(diào)經(jīng)顆粒中的藥材A、藥材B、藥材C、藥材D、藥材E以及藥材G進行定性鑒別。(3)檢查:按照《中國藥典》2010年版一部附錄Ⅰ制劑通則IC顆粒劑項下的規(guī)定制定相關(guān)檢查項目，包括粒度、水分、溶化性、裝量差異等。(4)含量測定:采用HPLC法對滋陰調(diào)經(jīng)顆粒中的二苯乙烯苷及川續(xù)斷皂苷Ⅵ含量進行定量測定，采用UV法對滋陰調(diào)經(jīng)顆粒中的總鞣質(zhì)、總皂苷及總黃酮含量進

5、行定量測定。
　　3.滋陰調(diào)經(jīng)顆粒的穩(wěn)定性考察(1)影響因素試驗:通過60℃±2℃的高溫試驗、相對濕度92.5％的高濕度試驗與4500 Lx±500 Lx的強光照射試驗考察滋陰調(diào)經(jīng)顆粒在高溫、高濕及強光照射條件下的穩(wěn)定性。(2)加速試驗:考察滋陰調(diào)經(jīng)顆粒在40℃±2℃，相對濕度75％±5％的條件下6個月內(nèi)的穩(wěn)定性。
　　4.滋陰調(diào)經(jīng)顆粒對大鼠離體子宮平滑肌收縮的影響(1)滋陰調(diào)經(jīng)顆粒濃度-子宮平滑肌活動力曲線的繪制:選用雌性

6、SD大鼠10只，皮下注射己烯雌酚造成動情期，剪取一段子宮，BL-420生物機能實驗系統(tǒng)記錄分析儀檢測給予不同劑量滋陰調(diào)經(jīng)顆粒后子宮平滑肌收縮曲線的變化。(2)滋陰調(diào)經(jīng)顆粒對大鼠離體子宮平滑肌收縮的影響:選用雌性SD大鼠10只，皮下注射己烯雌酚造成動情期，剪取一段子宮，BL-420生物機能實驗系統(tǒng)記錄分析儀分別檢測給予垂體后葉素以及5.0 mg.mL-1、10.0 mg.mL-1、15.0 mg.mL-1的滋陰調(diào)經(jīng)顆粒后子宮平滑肌收縮曲線

7、的變化。
　　結(jié)果:
　　1.滋陰調(diào)經(jīng)顆粒的制備工藝稱取處方量的藥材A、藥材B、藥材C、藥材D、藥材E、藥材F、藥材G、藥材H、藥材I。藥材A、藥材D、藥材H粉碎過10目篩后，與其余六味藥材加20倍水浸泡30 min后煎煮2次，每次1h，濾過，合并濾液。60℃濃縮至每1mL相當于1 g生藥材，加入乙醇使含醇量為50％，室溫靜置12h，濾過，濾液減壓回收乙醇至無醇味后，60℃濃縮至相對密度為1.10～1.15的清膏，每100m

8、L清膏加65.0 g可溶性淀粉以及0.2 g甜菊糖，混勻，以進風溫度為100℃、風機頻率為90 m3.h-1、流速為5 mL.min-1、霧化壓力為0.2MPa進行噴霧干燥，噴以70％乙醇制成軟材后擠壓過篩制粒，濕顆粒在60℃下干燥1h，整粒，密封包裝。
　　2.滋陰調(diào)經(jīng)顆粒的質(zhì)量標準(1)性狀:本品為淺棕色至棕色的顆粒，味微甜、澀，氣清香。(2)鑒別:各供試品薄層色譜中，在與對照藥材薄層色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點或熒光斑

9、點。(3)檢查:本品的粒度、水分、溶化性和裝量差異均符合藥典要求。(4)含量測定:本品含川續(xù)斷皂苷Ⅵ不得低于2.00 mg·g-1，二苯乙烯苷不得低于0.30 mg·g-1，總鞣質(zhì)不得低于5.00 mg·g-1，總皂苷不得低于1.20 mg·g-1，總黃酮不得低于9.00 mg·g-1。
　　3.滋陰調(diào)經(jīng)顆粒的穩(wěn)定性(1)影響因素試驗:本品在60℃±2℃的高溫、相對濕度92.5％的高濕度與4500 Lx±500 Lx的強光照射條件

10、下均具有較好的穩(wěn)定性。(2)加速試驗:本品在試驗期內(nèi)質(zhì)量穩(wěn)定。
　　4.滋陰調(diào)經(jīng)顆粒對大鼠離體子宮平滑肌收縮的影響本品能增加大鼠離體子宮平滑肌的收縮強度，提高子宮平滑肌活動力，從而促進大鼠離體子宮平滑肌的收縮。
　　結(jié)論:
　　稱取處方量的藥材A、藥材B、藥材C、藥材D、藥材E、藥材F、藥材G、藥材H、藥材I。藥材A、藥材D、藥材H粉碎，與其余六味藥材加20倍水浸泡30 min后煎煮2次，每次1h，煎液濾過，濾液濃縮至