hiv質(zhì)控與評價

1、艾滋病檢測實驗室的質(zhì)量控制與評價,孫偉東北京市疾病預(yù)防控制中心北京市艾滋病確證中心,北京市疾病預(yù)防控制中心,一、質(zhì)量控制,質(zhì)量控制是指為確保檢測工作正常進(jìn)行而在每一次實驗過程中必須采取的各種措施。涉及每一次試驗中，保證實驗正常進(jìn)行必須包括的各種措施。是對檢測過程的監(jiān)控，盡可能減少實驗過程中產(chǎn)生的各種誤差。具體內(nèi)容是將質(zhì)控品（內(nèi)部對照和外部對照）和檢測標(biāo)本一起實驗操作，從而了解分析過程的質(zhì)量情況。質(zhì)控的最終結(jié)果可以了解本次實

2、驗是否有效、試驗條件是否正常、試驗結(jié)果是否可靠。,北京市疾病預(yù)防控制中心,采集標(biāo)本前病人的準(zhǔn)備正確的標(biāo)本采集方法準(zhǔn)確及時的運送標(biāo)本實驗前正確地處理和保存標(biāo)本,實驗前質(zhì)量控制,北京市疾病預(yù)防控制中心,實驗中質(zhì)量控制,質(zhì)控品的準(zhǔn)備試劑盒的評價開展質(zhì)控圖質(zhì)控（或“即刻法”質(zhì)控）,北京市疾病預(yù)防控制中心,實驗后質(zhì)量控制,實驗后準(zhǔn)確填寫檢驗結(jié)果及時發(fā)出報告正確地解釋檢驗結(jié)果的臨床意義,北京市疾病預(yù)防控制中心,質(zhì)控品,內(nèi)部對照質(zhì)控血清

3、內(nèi)部對照質(zhì)控血清是指每個試劑盒內(nèi)廠方提供的一套陰性和陽性對照外部對照質(zhì)控血清外部對照質(zhì)控血清是各實驗室為了監(jiān)控每次檢測的重復(fù)性和穩(wěn)定性以及檢驗試劑盒批間差異而設(shè)置的一套陰性和陽性對照血清。設(shè)立外部對照還可以提示標(biāo)本處于弱陽性和臨界值狀態(tài)時的檢驗操作情況,北京市疾病預(yù)防控制中心,外部對照質(zhì)控血清的組成,理想的外部對照應(yīng)該包括強(qiáng)陽性對照、弱陽性對照、臨界值對照和陰性對照。在每次實驗時可只使用一個單一濃度水平的質(zhì)控品即弱陽性對照。

4、這個弱陽性對照的值以設(shè)定在該試劑盒Cut-off值的2－3倍為宜。,北京市疾病預(yù)防控制中心,外部對照質(zhì)控血清的來源,購買自備混合試劑盒內(nèi)部對照血清。稀釋HIV抗體強(qiáng)陽性血清。,北京市疾病預(yù)防控制中心,每一次試驗必須使用外部對照質(zhì)控血清建立質(zhì)控圖，即檢驗性能數(shù)據(jù)與計算出的“控制線”進(jìn)行比較的圖上面標(biāo)有一中心橫線及其上、下各一或兩條平行的質(zhì)控線，并有按時間順序填入的各質(zhì)控血清測定的數(shù)值，以便監(jiān)控實驗操作的一致性和結(jié)果的準(zhǔn)確性。同時

5、可以了解各批試劑盒之間的誤差（批間差異）。,外部對照的使用,北京市疾病預(yù)防控制中心,算術(shù)平均值（ ）：采用至少20次（天）所測得的外部對照質(zhì)控血清S/CO值結(jié)果計算出平均值標(biāo)準(zhǔn)差（s）：是描述樣本與均數(shù)之間離散程度的一個指標(biāo)，是與對照質(zhì)控血清S/CO值均值有關(guān)的預(yù)期范圍。一組S/CO值標(biāo)準(zhǔn)差以s 表示變異系數(shù)（cv）：是反映各次S/CO 值相對均值的離散程度的一個指標(biāo)，可以用于衡量被檢標(biāo)本檢測的重復(fù)性或精密度。,建立質(zhì)控圖的參數(shù),

6、,,北京市疾病預(yù)防控制中心,計算公式,北京市疾病預(yù)防控制中心,質(zhì)控圖的建立,北京市疾病預(yù)防控制中心,以每個質(zhì)控對照的OD值 /CUT OFF比值（S/CO）為縱座標(biāo)（Y軸），每一次實驗為橫座標(biāo)（X軸）建立質(zhì)控圖。 ①采用至少20次（天）所測的外部對照質(zhì)控血清S/CO 值結(jié)果計算出平均值（ ）； ②計算20次S/CO值的標(biāo)準(zhǔn)差（s）； ③計算出 ±1s， ± 2s ，± 3s范圍；④標(biāo)出每次

7、實驗外部對照值，每次實驗質(zhì)控的結(jié)果依次點入該質(zhì)控圖框架圖中。,質(zhì)控圖的建立,北京市疾病預(yù)防控制中心,質(zhì)控圖制作實例,1、計算均值=1.742、計算標(biāo)準(zhǔn)差=0.253、按標(biāo)準(zhǔn)差計算范圍如下：1S=1.74+/-（1×0.25）=（1.49-1.99）2S=1.74+/-（2×0.25）=（1.24-2.24）3S=1.74+/-（3×0.25）=（0.99-2.49）,北京市疾病預(yù)防控制中心

8、,質(zhì)控圖,北京市疾病預(yù)防控制中心,質(zhì)控圖,北京市疾病預(yù)防控制中心,①外部對照S/CO值超出±2s，系統(tǒng)處于告警狀態(tài)，應(yīng)予注意，是否可以繼續(xù)檢測需要進(jìn)一步觀察； ②失控：外部對照S/CO值超出±3s，系統(tǒng)處于失控狀態(tài)，本次實驗結(jié)果不能被接受，需查找原因，重新檢測；③位移：如果幾個連續(xù)質(zhì)控對照值（3-5次）都落在均值的一側(cè)稱之為位移，通常表示存在大的變化（失控）。引起位移的原因有使用新批號的試劑盒、使用新試劑、實驗員

9、的更換、孵育溫度的改變、儀器故障等。④趨勢：當(dāng)幾個連續(xù)質(zhì)控對照值（5-7個）幾乎按一個方向分布時稱之為趨勢，通常由參數(shù)的緩慢改變引起，如試劑失效和移液器逐漸不準(zhǔn)確等。發(fā)生位移和趨勢的最常見的原因是試劑（如酶標(biāo)記物）或?qū)φ盏氖А?質(zhì)控圖的判定和分析,北京市疾病預(yù)防控制中心,北京市疾病預(yù)防控制中心,①建立質(zhì)控圖的目的是發(fā)現(xiàn)出現(xiàn)的問題，所以在每次實驗時應(yīng)該觀察外部對照值是否在允許范圍之內(nèi)；②為減少試劑盒更換造成的變化，最好長期穩(wěn)定地使用

10、一種質(zhì)量好的試劑盒，更換不同廠家的試劑盒及改用新批號試劑盒應(yīng)重新制作質(zhì)控圖；③每月定期召開質(zhì)控分析會，討論本月質(zhì)控情況；④質(zhì)控結(jié)果失控時，應(yīng)填寫報告單交質(zhì)量負(fù)責(zé)人，分析原因并決定是否發(fā)出檢測報告；⑤使用新批次的外部對照質(zhì)控血清時，必須重新繪制質(zhì)控圖。變異系數(shù)小于20%，表示處于穩(wěn)定狀態(tài)。,質(zhì)控圖分析要點,北京市疾病預(yù)防控制中心,在20%）時，提示加樣量不一致。校準(zhǔn)加樣器及每次更換吸頭加樣可以減少cv值使對照值更趨一致。,變異系數(shù)（

11、cv）,北京市疾病預(yù)防控制中心,過去認(rèn)為OD值在CUT OFF值±10%~15%范圍內(nèi)的樣本定為灰色帶反應(yīng)。對這類標(biāo)本最好復(fù)檢，或用其他方法再檢測，通過灰區(qū)的判斷有助于發(fā)現(xiàn)早期感染者目前的EIA試劑已有較高的靈敏度，EIA檢測應(yīng)該只有兩種結(jié)果：陽性或陰性,灰區(qū)問題,北京市疾病預(yù)防控制中心,即刻法質(zhì)控,在對同一批外部質(zhì)控血清連續(xù)測定3次后，即可對第三次檢驗結(jié)果進(jìn)行質(zhì)控計算方法：1、將質(zhì)控血清的測定值從小到大排列：X1,

12、X2 , X3 … Xn（X1為最小值， Xn 為最大值）；2、計算 和 s ；3、計算SI上限值和SI下限值,北京市疾病預(yù)防控制中心,4、將SI上限和SI下限與表中數(shù)字比較當(dāng)SI上限和SI下限 n3s值時表示該值已在3s范圍之外， 屬“失控” 數(shù)值處于“告警” 和“失控”狀態(tài)應(yīng)舍去，重新測定該質(zhì)控血清和病人樣品。舍去的只是失控的數(shù)值，其它值仍可繼續(xù)使用,即刻法質(zhì)控,北京市疾病預(yù)防控制中心,必須使用經(jīng)衛(wèi)生部批準(zhǔn)或注冊，中

13、國藥品生物制品檢定所批批檢定合格、有效期內(nèi)且保存條件符合要求的國產(chǎn)或進(jìn)口HIV1+2混合型抗體初篩試劑盒按照SOP中規(guī)定的要求進(jìn)行操作，對影響檢驗的物理因素，如孵育時間、反應(yīng)溫度、洗滌程序和次數(shù)等，均應(yīng)按試劑盒說明書的要求操作，以保證質(zhì)量控制實驗前必須檢查待檢標(biāo)本的質(zhì)量，如標(biāo)本不符合要求必須重新采集標(biāo)本。冰凍的標(biāo)本應(yīng)全部融化，搖勻后檢測每次檢驗，內(nèi)部對照和外部對照的結(jié)果必須在允許的范圍內(nèi)，否則應(yīng)視為無效,質(zhì)量控制的基本要求,北京市

14、疾病預(yù)防控制中心,二、質(zhì)量評價,質(zhì)量評價是一種手段，用于判定實驗室測定結(jié)果的質(zhì)量。通常使用有關(guān)權(quán)威機(jī)構(gòu)提供的一套質(zhì)控品(質(zhì)量控制參比血清)從外部來評價實驗室的工作，即對數(shù)個實驗室的檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計分析和評價。這種評價方式常稱為室間質(zhì)量評價（EQA）。質(zhì)量評價用于評價質(zhì)量保證體系的效果，其目的在于幫助發(fā)現(xiàn)其質(zhì)控與質(zhì)保系統(tǒng)有無問題。各實驗室可根據(jù)上一級提供的質(zhì)評檢驗報告的結(jié)果，檢查其質(zhì)量控制狀況。,北京市疾病預(yù)防控制中心,必要性,是監(jiān)督檢驗

15、質(zhì)量、得到質(zhì)量保證的重要途徑之一是一種有系統(tǒng)、有組織的外部約束和橫向參比措施。不僅有助于提高各參評實驗室的檢測質(zhì)量，增加實驗室間檢驗結(jié)果的可比性，還可通過試劑評價、方法比較和技術(shù)交流等方式，促進(jìn)實驗方法的進(jìn)步和檢驗試劑的優(yōu)化，這些工作都直接或間接地提高了檢驗質(zhì)量,北京市疾病預(yù)防控制中心,也稱為能力驗證（PT），是指多家實驗室分析統(tǒng)一標(biāo)本并由外部獨立機(jī)構(gòu)收集、反饋實驗室上報結(jié)果并評價實驗室檢測能力的活動。主要用途：評價實驗室的分析

16、能力；監(jiān)控實驗室可能出現(xiàn)的技術(shù)問題；改正存在的問題；改進(jìn)分析能力、實驗方法和其它實驗室的可比性；評價實驗室工作人員的能力；教育和訓(xùn)練實驗室工作人員；作為實驗室質(zhì)量保證的外部監(jiān)督工具。,室間質(zhì)量評價,北京市疾病預(yù)防控制中心,PT報告中可以回答兩個重要問題,比較本實驗室與使用同一方法（試劑）的其他實驗室的結(jié)果差異與做同一試驗但使用不同方法（試劑）的實驗室結(jié)果進(jìn)行比較通過比較可以提示實驗室室內(nèi)質(zhì)控難以發(fā)現(xiàn)的偏差或系統(tǒng)誤差。

17、,北京市疾病預(yù)防控制中心,PT失敗時應(yīng)注意,核查原始記錄，確認(rèn)沒有轉(zhuǎn)抄錯誤；確認(rèn)當(dāng)時測定時，室內(nèi)質(zhì)控可接受審核儀器維護(hù)和校準(zhǔn)記錄查對標(biāo)本處理記錄核對與PT標(biāo)本同時測定的其它實驗記錄若有剩余PT標(biāo)本，重復(fù)分析,北京市疾病預(yù)防控制中心,PT的不足,評價的可能不是實驗室的正常水平而是它的最好水平有時成績不好并不代表實驗室水平不行有時成績比實際檢測水平要好，靶值確定是一個十分重要的因素PT不可能確認(rèn)分析前和分析后存在的許多問題

18、整個過程時間較長,北京市疾病預(yù)防控制中心,室間質(zhì)評與室內(nèi)質(zhì)控的關(guān)系⑴,室內(nèi)質(zhì)控是對檢驗結(jié)果的即時性評價，通過對室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果的連續(xù)觀察，監(jiān)測實驗室檢驗結(jié)果的精密性。室內(nèi)質(zhì)控是實驗室檢測質(zhì)量保證的基礎(chǔ)，沒有完善的室內(nèi)質(zhì)控措施就談不上質(zhì)量保證，即使在室間質(zhì)評中取得很好的成績也不能說明實驗室檢驗結(jié)果的可靠性。因此，實驗室的質(zhì)量保證工作，應(yīng)首先從室內(nèi)質(zhì)控抓起，持之以恒，不斷的觀察、分析和解決實驗中的質(zhì)量問題，才能使檢驗工作的質(zhì)量得到穩(wěn)步提高。,北

19、京市疾病預(yù)防控制中心,,室間質(zhì)評是對檢驗結(jié)果的回顧性評價，其主要目的是評價和修正實驗室檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，并與各參評單位結(jié)果比較，了解本室結(jié)果的偏倚程度，是發(fā)現(xiàn)實驗室系統(tǒng)誤差的重要手段之一。,室間質(zhì)評與室內(nèi)質(zhì)控的關(guān)系⑵,北京市疾病預(yù)防控制中心,室間質(zhì)評與室內(nèi)質(zhì)控的關(guān)系⑶,室間質(zhì)評應(yīng)在室內(nèi)質(zhì)控具有相當(dāng)水平的基礎(chǔ)上進(jìn)行，因為實驗室沒有穩(wěn)定可靠的室內(nèi)質(zhì)控措施，就不可能獲得良好的精密性，沒有良好的精密性是談不上準(zhǔn)確性的。因此，實驗室不能好高騖遠(yuǎn)，

20、舍本求末,只重視室間質(zhì)評的成績，而不實實在在地抓好室內(nèi)質(zhì)控。當(dāng)然，室內(nèi)質(zhì)控和室間質(zhì)評都是質(zhì)量保證的重要環(huán)節(jié)之一，兩者應(yīng)互為補(bǔ)充，辯證統(tǒng)一，缺一不可。,北京市疾病預(yù)防控制中心,室間質(zhì)量評價體系,1.國家艾滋病參比實驗室和個別省級艾滋病確 證中心接受國際相關(guān)機(jī)構(gòu)的質(zhì)量評價。2.國家艾滋病參比實驗室對全國各省、自治區(qū)和直轄市的艾滋病確證中心實驗室和其他艾滋病確證實驗室進(jìn)行質(zhì)量評價，并負(fù)責(zé)提供質(zhì)量評價標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)以及有關(guān)文件。3

21、.艾滋病確證中心實驗室對所在省份內(nèi)各級艾滋病篩查實驗室進(jìn)行質(zhì)量評價。,北京市疾病預(yù)防控制中心,室間質(zhì)評方式,1.隨機(jī)派調(diào)查員到實驗室實地調(diào)查2.發(fā)放問卷調(diào)查表3.發(fā)放質(zhì)控物4.以上方法相結(jié)合,北京市疾病預(yù)防控制中心,質(zhì)量評價管理,1.實驗室質(zhì)量評價工作每年要進(jìn)行總結(jié)，以提高質(zhì)量評價的工作質(zhì)量。2.表彰質(zhì)量評價工作做得好的實驗室，推廣和宣傳質(zhì)量管理好的經(jīng)驗。3.對多次質(zhì)量評價不合格的實驗室，由主管機(jī)構(gòu)(衛(wèi)生部疾病控制司和省級