T淋巴細胞亞群分析全血質控物的研制與評價.pdf

1、目的：為了保證T淋巴細胞亞群分析結果的可比性和可靠性，各臨床實驗室必須開展室內質量控制，并參加室間質量評價活動。這些質量保證措施的開展均需要合格的T淋巴細胞亞群分析全血質控物，但是目前無國產的T淋巴細胞亞群分析全血質控物，質控物的提供主要依賴于國外生產商(如Beckman Coulter公司、BD公司)，進口質控物價格昂貴、購買周期長，給各臨床實驗室和室間質量評價組織機構的應用帶來較大困難。為此，衛(wèi)生部臨床檢驗中心參考大量國內外文獻研制

2、了T淋巴細胞亞群分析的全血質控物。 方法：首先在研制T淋巴細胞亞群分析全血質控物的過程中，對多種影響因素進行了研究和分析，選擇最佳方案，制備了批號分別為20081027、20081111和20090402的T淋巴細胞亞群分析全血質控物。依據(jù)CNAS—GL03《能力驗證樣品均勻性和穩(wěn)定性評價指南》及ISO Guide35《標準物質/標準樣品的定值—通用原則和統(tǒng)計原理》，每個批號隨機抽取10支樣本，每支樣本按照隨機順序重復檢測2次，

3、對三個批號的自制質控物CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+淋巴細胞百分比三個指標的均勻性進行評價，對檢測結果進行單因素方差分析并計算均勻性的不確定度；按照不同的時間間隔隨機抽取有足夠代表性的樣本，對20081027和20081111批號自制質控物的三個指標的穩(wěn)定性進行評價，包括不同儲存溫度對質控物檢測結果的影響、開蓋穩(wěn)定性及長期穩(wěn)定性的評價，對檢測結果進行一元線性回歸分析并計算長期穩(wěn)定性的不確定度；同時平行檢測進口質控物作為對照

4、。使用型號為Coulter—EPICS XL、BD—FACSCaliber的流式細胞儀各2臺分別檢測批號為20081027和20081111的自制質控物，并使用型號為Coulter—EPICSXL、Coulter—Cytomics FC500、BD—FACSCaliber、BD—FACSCanto的流式細胞儀各1臺分別檢測批號為20090402的自制質控物及進口質控物，以觀察自制質控物不同型號流式細胞儀的適用性；使用批號為2008102

5、7和20081111的自制質控物與進口質控物同時試用于Coulter—EPICS XL機型流式細胞儀的室內質量控制；并發(fā)放批號為20081027和20081111的自制質控物(編號為200806、200807)進行室間質量評價調查，將調查結果與進口質控物(編號為200801～200805)進行分析比較，了解自制質控物用于室間質量評價的可行性。 結果：①選取抗凝新鮮人血為原料，采用溶血劑提取白細胞后，按照一定的固定條件分別固定紅細

6、胞及白細胞，用保養(yǎng)液保存固定處理后的紅、白細胞制得全血質控物。②質控物均勻性結果顯示，樣品內和樣品間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；20081027、20081111和20090402批號自制質控物及進口質控物三個指標均勻性檢測結果的變異系數(shù)(CV)變化范圍分別為1.51％～1.93％、0.60％～1.13％、0.58％～1.20％、0.74％～1.58％，均小于流式細胞儀說明書規(guī)定的熒光分辨率的CV值(CV≤2.00％)。20081

7、027、20081111和20090402批號自制質控物及進口質控物三個指標均勻性的不確定度范圍分別為0.189％～0.318％、0.184％～0.280％、0.200％～0.302％、0.209％～0.284％，均小于方法重復性測量的不確定度。③室溫放置15天20081027和20081111批號自制質控物三個指標的測定結果與2℃～8℃放置的自制質控物測定結果的比值變化范圍分別為93.79％～104.45％、94.03％～103.91

8、％；37℃下放置15天20081027和20081111批號自制質控物三個指標的測定結果與2℃～8℃放置的自制質控物測定結果的比值變化范圍分別為32.17％～103.63％、14.20％～100.20％。20081027和20081111批號自制質控物三個指標開蓋后不同時間的檢測結果與第1天檢測結果的絕對偏差范圍分別為-0.13％～1.44％、0～2.40％，一元線性回歸的方差分析結果顯示P值均大于0.05，表明開蓋后14天內隨著開蓋時

9、間的延長檢測結果無趨勢變化。19周內的長期穩(wěn)定性評價結果顯示自制質控物的三個指標隨著保存時間均無線性趨勢變化(P>0.05)；20081027和20081111批號自制質控物及進口質控物三個指標長期穩(wěn)定性的不確定度范圍分別為0.470％～1.114％、0.338％～0.798％、0.473％～1.266％，其中僅20081027批號自制質控物CD3+CD4+淋巴細胞百分比長期穩(wěn)定性的不確定度略大于進口質控物，其余指標均小于進口質控物，且

10、均小于方法重復性測量的不確定度。④自制質控物在四種型號流式細胞儀上進行檢測，圖形顯示均可準確設定淋巴細胞群，各陽性細胞群與陰性細胞群分離較好。20081027和20081111批號自制質控物三個指標在Coulter—EPICS XL、BD—FACSCaliber機型儀器間檢測結果的最大絕對偏差范圍分別為1.88％～3.18％、0.67％～0.99％。20090402批號自制質控物及進口質控物三個指標在Coulter—EPICS XL、C

11、oulter—Cytomics FC500、BD—FACSCaliber、BD—FACSCanto機型儀器間檢測結果的最大絕對偏差范圍分別為3.84％～10.45％、3.17％～6.99％。⑤20081027和20081111批號自制質控物及進口質控物每次室內質量控制檢測結果都在均值±3s范圍之內，可認為自制質控物適用于Coulter—EPICS XL機型流式細胞儀進行室內質量控制。⑥室間質量評價調查結果顯示，在BD公司儀器組，自制質控

12、物與進口質控物的各指標變異系數(shù)(CV)范圍分別為：2.94％～8.17％、2.84％～6.89％；在Beckman Coulter公司儀器組，自制質控物與進口質控物的各指標CV范圍分別為：3.07％～14.25％、1.84％～5.14％。 結論：研制的T淋巴細胞亞群分析全血質控物均勻性良好。室溫放置15天對自制質控物的影響較小，而37℃條件下放置時不穩(wěn)定：開蓋后2℃～8℃保存14天的檢測結果穩(wěn)定；2℃～8℃條件下保存19周內穩(wěn)定