實(shí)驗(yàn)出凝血檢查

1、實(shí)驗(yàn) 出凝血檢查,（一）血標(biāo)本的采取應(yīng)注意的問題,,,. 、凝血實(shí)驗(yàn)檢查均使用靜脈血。采血人員應(yīng)技術(shù)熟練，以防止組織損傷，外源性凝血因子進(jìn)入針管。,,．一般血液采集，進(jìn)入容器至進(jìn)行實(shí)驗(yàn)所用的時(shí)間越短，所分析的凝血因子被保護(hù)得越好。從輸液三通管取出血的做法不可取。,,．取血時(shí)病人應(yīng)松馳，環(huán)境溫暖，防止靜脈攣縮，止血帶的壓力要盡可能小，取血時(shí)，拉針?biāo)ǖ乃俣纫鶆?，使血液平穩(wěn)地進(jìn)入注射器，防止氣泡的產(chǎn)生。,,．一旦取樣完畢，立即與抗

2、凝劑充分混合，一般提倡使用真空采血管。,,．用硅化玻璃或塑料注射器采血?？紤]結(jié)果的精確性，應(yīng)將試管刻度的可能誤差控制在既定體積的以內(nèi)。,,.采血后標(biāo)本在低溫保存且在一定時(shí)間范圍內(nèi)。,,. 國(guó)際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（）、國(guó)際血栓與止血委員會(huì)（）推薦使用（含）或的枸櫞酸鈉作為凝血因子檢查的抗凝劑。,,.抗凝劑在血標(biāo)本的絕對(duì)含量可改變血漿中鈣離子濃度，進(jìn)而影響試驗(yàn)結(jié)果，因此應(yīng)根據(jù)患者紅細(xì)胞比例（）狀況隨時(shí)調(diào)整抗凝劑用量。,（二）應(yīng)用試劑應(yīng)注意

3、的問題,,,.組織凝血活酶工作制劑的國(guó)際敏感指數(shù)（），為了使不同敏感性的組織凝血活酶在檢測(cè)中能得到同樣的結(jié)果，必須要制定一個(gè)共同的敏感性指標(biāo)。,,.凝血活酶和部分活化凝血活酶的使用步驟必須嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。通常在使用前必須充分混勻試劑，以使微粒重新均勻懸浮于液體中。,,.試劑準(zhǔn)備過程中應(yīng)該使用去離子水。,,.正常對(duì)照血漿通常將多份健康人血標(biāo)本混在一起，以彌補(bǔ)個(gè)體誤差。,（三）使用實(shí)驗(yàn)器材應(yīng)注意的問題,,,. 玻璃器皿的要求：貯存和測(cè)試

4、時(shí)應(yīng)選用干凈、沒有劃痕的試管。,,. 溫度的要求：人工測(cè)定終點(diǎn)法要求水浴箱的溫度必須保持在（±）℃，并且周圍照明設(shè)備要好，便于讀取終點(diǎn)。,（四）實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)注意的問題,,,. 許多試驗(yàn)誤差都來源于技術(shù)的錯(cuò)誤。在實(shí)驗(yàn)技術(shù)、試劑、溫度及值上很微小的變化都會(huì)導(dǎo)致試驗(yàn)結(jié)果明顯的變化。,,. 手工法或試管法檢查時(shí)，傾斜試管動(dòng)作一定要輕，角度要小，以減少血液與管壁的接觸面積。,,. 血液凝固主要是酶催化的反應(yīng)，所以實(shí)驗(yàn)過程中要嚴(yán)格控制理想的

5、環(huán)境和溶液的離子強(qiáng)度。,,. 試驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確還取決于所用的反應(yīng)物的量、加入順序和不同反應(yīng)物的孵育時(shí)間。,,. 、需乏血小板血漿。,,. 試驗(yàn)前檢查血漿是否有溶血、黃疸、脂血和出現(xiàn)凝塊。,. 報(bào)告方式：以的秒（）數(shù)報(bào)告。以患者（）正常對(duì)照（）的比（）報(bào)告。在口服藥物治療監(jiān)控時(shí)以報(bào)告。規(guī)定，不再用百分比（活動(dòng)度）報(bào)告。以秒報(bào)告。,年提出值用（ 國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化比值）作為結(jié)果報(bào)告形式，并用以作為抗凝治療監(jiān)護(hù)的指標(biāo)。,,,［病人（）正常人平

6、均（）］受檢者（）正常對(duì)照（）：國(guó)際敏感指數(shù)（ ）～,,、、、、、,凝 血 時(shí) 間 測(cè) 定,,目的：掌握玻璃試管法凝血時(shí)間測(cè)定的方法,,原理：,離體靜脈血與玻璃表面接觸后，血中因子活化并啟動(dòng)內(nèi)源性凝血途徑，最終生成纖維蛋白而使血液凝固所需的時(shí)間。,器材：,直徑玻璃試管支靜脈采血器材℃恒溫浴箱秒表,,步驟：支試管各血，每隔傾斜，第一管計(jì)時(shí)后，立即觀察第二、三管并計(jì)時(shí)，直至血液凝固。結(jié)果判斷：從血液剛進(jìn)入注射器至第管凝固所

7、需時(shí)間即為凝血時(shí)間。,,正常參考值：～分鐘報(bào)告方式： （玻璃試管法）,注意事項(xiàng)：,試管應(yīng)潔凈干燥，抽血應(yīng)“一針見血”且血液中不含泡沫。溫度恒定為℃，傾斜試管角度應(yīng)在°左右。,評(píng)價(jià)：,凝血時(shí)間曾用玻片法測(cè)定，但由于毛細(xì)血管采血，易混入組織液而使凝血時(shí)間正常，屬于淘汰方法。延長(zhǎng)：嚴(yán)重內(nèi)源性凝血途徑凝血因子有缺陷；血中抗凝物質(zhì)增多；肝素治療縮短：高凝狀態(tài)（早期）,凝 血 酶 原 時(shí) 間,,原理：,在乏血小板血漿中加入組織

8、因子和鈣離子（鈣凝血活酶）后，血漿發(fā)生凝固的時(shí)間即為凝血酶原時(shí)間（）。,步驟：,取空腹靜脈血加入含有枸櫞酸鈉的試管中混勻備用?？鼓噪x心分離血漿將試劑、正常人混合血漿、待測(cè)血漿與℃預(yù)熱。血漿加入混勻的試劑，開動(dòng)秒表計(jì)時(shí)。,,正常參考值：：～秒：±：～,,報(bào)告方式：：，正常人血漿：：,注意事項(xiàng)：,試管應(yīng)潔凈干燥，抽血應(yīng)“一針見血”，抗凝劑與血液比例（：）應(yīng)準(zhǔn)確。取血后內(nèi)完成測(cè)定。鈣凝血活酶必須標(biāo)有國(guó)際敏感指

9、數(shù)（），越接近于越敏感。標(biāo)本測(cè)定前應(yīng)先測(cè)定正常人混合血漿，其值在允許范圍內(nèi)才能測(cè)定樣本。,評(píng)價(jià)：,血漿凝血酶原是一種篩選試驗(yàn)，是用來證實(shí)先天性或獲得性纖維蛋白原、凝血酶原和凝血因子、、的缺陷或相應(yīng)抑制物的存在，也用于監(jiān)測(cè)口服抗凝治療時(shí)引起的凝血酶原和因子、水平的下降。,實(shí)質(zhì)：,對(duì)檢測(cè)樣本（血漿）中存在凝血激酶時(shí)的再鈣化反應(yīng)，這種過程包括了因子、組織因子、磷脂、鈣離子對(duì)凝血酶原的活化，凝血酶裂解纖維蛋白原和纖維蛋白單體的聚集交聯(lián)。,活化

10、部分凝血活酶時(shí)間測(cè)定,,原理：,用白陶土激活因子、腦磷脂代替血小板磷脂，測(cè)定乏血小板血漿加入后凝固所需時(shí)間。,步驟：,采血 空腹靜脈血 枸櫞酸鈉混勻。分離血漿 離心分鐘分離血漿。溶解試劑 臨用時(shí)加蒸餾水，室溫靜置以上，混勻后使用。預(yù)溫活化 血漿試劑混勻，℃準(zhǔn)確孵育（其間輕輕搖動(dòng)數(shù)次）加鈣計(jì)時(shí) 加入 混勻并立即開動(dòng)秒表計(jì)時(shí)，后，觀察混合液流動(dòng)狀態(tài)。,,正常參考值：一般在～（不同儀器和試劑所測(cè)之參考值有差別）報(bào)告方式：

11、：，正常人血漿：,注意事項(xiàng)：,采血時(shí)穿刺盡量一針見血，不要淤血和氣泡，采血后立即與抗凝劑混合，盡快送往實(shí)驗(yàn)室。使用枸櫞酸鹽（抗凝）血漿 如果不能立即測(cè)試，應(yīng)盡快分離血漿，盛血漿的容器加塞，防止值改變血漿在～℃下保留天 鈣凝血活酶必須標(biāo)有國(guó)際敏感指數(shù)（），越接近于越敏感。,臨床意義：,延長(zhǎng)：表明有內(nèi)源性凝血途徑有關(guān)因子的缺陷（血友病）和纖維蛋白原缺乏。 纖維活力增加，如繼發(fā)性，原發(fā)性纖溶以及血循環(huán)中有纖維蛋白（原）降解產(chǎn)物（）。

12、 血循環(huán)中有抗凝物質(zhì)。,,縮短：　　　 高凝狀態(tài)，如的高凝期，促凝物質(zhì)進(jìn)入血液以及凝血因子的活性增高等。,評(píng)價(jià)：,和同時(shí)檢測(cè)是目前二期止血缺陷的主要篩選試驗(yàn)組合。,在有臨床出血癥狀的前提下：,提示正常 延長(zhǎng) 因子的缺陷延長(zhǎng) 正常 因子、、缺陷正常 正常 懷疑因子缺陷可能延長(zhǎng) 延長(zhǎng) 除因子、、、缺陷 外，主要是異?？鼓镔|(zhì) 的增多,,,,,血漿復(fù)鈣時(shí)間,,原

13、理：,在去鈣離子的抗凝血漿中，重新加入適量的鈣后，血漿發(fā)生凝固。,步驟：,草酸鈉靜脈血混勻，離心分離血漿。血漿置℃水浴中， ，立即開動(dòng)秒表記錄時(shí)間。,,正常參考值： ±分（分鐘）,注意事項(xiàng)：,不要溶血，否則時(shí)間縮短新鮮配制分離血漿以轉(zhuǎn)分為宜，高速離心可使大量血小板下沉而導(dǎo)致復(fù)鈣時(shí)間延長(zhǎng)。,復(fù)鈣交叉時(shí)間,,步驟：,按下列比例準(zhǔn)備份待測(cè)血漿：加樣量 受檢血漿

14、（）－ 正常血漿（） －上述試管，置℃ ，加 ，混勻后，記錄血漿凝固時(shí)間。,,,,注意事項(xiàng)：,所用血漿均為富含血小板血漿，分離出血漿后需在內(nèi)檢測(cè)完畢。,臨床意義：,最早作為內(nèi)源性凝血系統(tǒng)相關(guān)凝血因子缺陷的篩選檢查，但由于這個(gè)試驗(yàn)不如，又容易受血小板數(shù)量和功能影響，目前只用來篩選是否存在病理性抗凝物質(zhì)增多。,,延長(zhǎng)的復(fù)鈣時(shí)間如被量的正常血漿所糾正，則表示受檢血漿中缺乏內(nèi)源凝血因子；如不被少量正常血漿糾正，提

15、示存在異常抗凝物質(zhì)。,血漿纖維蛋白原,,,纖維蛋白原的測(cè)定方法眾多，大體上分三大類：基于經(jīng)加凝血酶后，形成纖維蛋白的方法，即可凝固蛋白法。物理、化學(xué)測(cè)定法。免疫學(xué)測(cè)定法。,目的和原理,,,為了解凝血途徑最后環(huán)節(jié)的狀況，排除纖維蛋白原減少、異常對(duì)凝血篩選試驗(yàn)的影響，了解纖溶活動(dòng)度等可選擇本試驗(yàn)。,,法以凝血酶作用于受檢血漿中的纖維蛋白原，使其形成纖維蛋白，血液凝固。,,纖維蛋白原的量與凝固時(shí)間成負(fù)相關(guān)，檢測(cè)結(jié)果與參比血漿制成的標(biāo)準(zhǔn)曲

16、線對(duì)比可得出纖維蛋白原的含量。,步驟：,將參比血漿用血漿稀釋液作原倍、：、：、：、：稀釋管。取稀釋血漿于小試管中，置℃水浴預(yù)熱分鐘，再加凝血酶溶液，記錄時(shí)間。,,,,,,,,,,相關(guān)分析：,首先先清除內(nèi)存。，濃度（或），輸入（如不取對(duì)數(shù)，濃度直接輸入， 讀取值輸入；全部數(shù)據(jù)輸入完畢，按讀出相關(guān)系數(shù)。待測(cè)讀數(shù)或→讀出相關(guān)濃度。如不取對(duì)數(shù)，待測(cè)讀數(shù)直接?→讀出相關(guān)濃度。最終濃度需根據(jù)樣品稀釋倍數(shù)乘積。,^,標(biāo)準(zhǔn)曲線：,（

17、） （）,,,,,,,,,,,,,,,如血漿纖維蛋白原含量大于 時(shí)，應(yīng)稀釋血漿后重測(cè)，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。低于 時(shí)，需將原血漿改為∶或∶稀釋，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得結(jié)果后，除以或除以。,,正常參考值： ～,臨床意義：,纖維蛋白原增高除生理情況下的應(yīng)激反應(yīng)、妊娠后期外，主要出現(xiàn)感染、灼傷、動(dòng)脈粥樣硬化、急性心肌梗死、多發(fā)性骨髓瘤、糖尿病、敗血癥

18、等。纖維蛋白原減少見于、原發(fā)性纖溶亢進(jìn)癥、重癥肝炎、肝硬化和溶栓治療時(shí)。,評(píng)價(jià)：,方法測(cè)定的是纖維蛋白原功能，因此需纖維蛋白原結(jié)構(gòu)正常，且有一定的含量，對(duì)低（無）纖維蛋白原血癥和因此后纖維蛋白原血癥應(yīng)改用和等免疫檢測(cè)手段。,主要誤差來源：,血漿稀釋不準(zhǔn)。凝血酶活性不足或失效。凝血酶一般應(yīng)在低溫保存，稀釋后在塑料(聚乙烯)試管中，置℃可保存活性小時(shí)。測(cè)定終點(diǎn)觀察不準(zhǔn)確，尤其是纖維蛋白原含量高時(shí)，往往很快即凝固，手工法重復(fù)性較差，不易