抗除草劑CYP81A6和耐鹽SaNHX基因轉(zhuǎn)化紅麻的初步研究.pdf

1、紅麻(Hibiscus Cannabinus L.)為錦葵科(Malvaceae)木槿屬(Hibiscus)一年生韌皮纖維作物，是麻紡和造紙工業(yè)的重要原料。紅麻抗除草劑和抗鹽性的獲得，一方面可有效防治雜草并降低生產(chǎn)成本，另一方面可以充分利用鹽堿地和江河湖濱灘。 本實(shí)驗(yàn)利用TTC法與苯胺藍(lán)染色法對(duì)紅麻離體花粉進(jìn)行檢測(cè)，利用組織切片法對(duì)授粉后花柱組織進(jìn)行觀察，利用剪除花柱法觀察授粉后紅麻結(jié)實(shí)率，利用石蠟切片觀察子房受精狀態(tài)。結(jié)果如下

2、： (1)花粉離體后，活力在短時(shí)間內(nèi)急劇下降，7h后活力消失殆盡；紅麻花粉在培養(yǎng)基(蔗糖硼酸)上，0.5h已經(jīng)萌發(fā)，最后萌發(fā)率在80％，但花粉管很難繼續(xù)生長(zhǎng)。 (2)紅麻花粉在柱頭上20min開(kāi)始萌發(fā)，授粉4h后花粉管穿過(guò)花柱，進(jìn)入子房；6h左右子房?jī)?nèi)花粉管通道形成；12h花粉管通過(guò)珠孔進(jìn)入胚囊，釋放內(nèi)含物；18h時(shí)觀察到胚囊，認(rèn)為已經(jīng)完成受精作用。 (3)剪除授粉后花柱(2.5cm)，0-2h時(shí)結(jié)實(shí)率和單果結(jié)粒

3、數(shù)極低，分別為10％和10粒；4-6h時(shí)，結(jié)實(shí)率和單果結(jié)粒數(shù)分別為73％和20粒，此時(shí)認(rèn)為大多數(shù)花粉穿過(guò)花柱進(jìn)入子房完成受精作用；花粉管穿過(guò)花柱的時(shí)間與切片法觀察結(jié)果相一致。 (4)根據(jù)試驗(yàn)與田間觀察分析，最適外源基因?qū)氲拈_(kāi)始時(shí)期為授粉后12h。 根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定的最適導(dǎo)入時(shí)間，本實(shí)驗(yàn)利用花粉管通道法將抗除草劑基因(水稻細(xì)胞色素P450基因CYP81A6)和抗鹽基因(大米草Na+/H+泵基因 SaNHX)導(dǎo)入紅麻品

4、種福紅992中。首先進(jìn)行了紅麻對(duì)除草劑和鹽水的抗性的試驗(yàn)，獲得T1代后，然后利用臨界濃度對(duì)T1代進(jìn)行了抗性檢測(cè)，獲得的抗性植株進(jìn)行分子檢測(cè)。 (5)紅麻苗期(3-4葉)對(duì)抗除草劑(苯達(dá)松)的適宜篩選濃度為1500mg/L。T1代篩選后共獲得抗性植株135株，其中子房注射法59株，子房滴加法76株。PCR檢測(cè)后共有陽(yáng)性植株32株，其中子房注射法13株，轉(zhuǎn)化率為0.78％；子房滴加法19株轉(zhuǎn)化率為1.26％。 (6)紅麻苗期