水稻抗除草劑基因CYP81A6轉化油菜的研究.pdf

1、油菜（Brassica napus）是我國主要的油料作物，是食用油、蛋白質和工業(yè)原料的重要來源。雜草極大地影響了油菜的產量和品質，因此，培育抗除草劑油菜品種對油菜的生產具有十分重要的意義。苯達松和磺酰脲是兩種不同的除草劑，在生產上被廣泛用于清除稻田的闊葉雜草。細胞色素P450基因CYP81A6編碼一種單加氧酶，能使水稻對苯達松和磺酰脲產生抗性。轉入了CYP81A6基因的擬南芥和煙草也能獲得對這兩種除草劑的抗性。本研究以甘藍型油菜品系甲5

2、72為受體，通過農桿菌（Agrobacterium tumefaciens）介導轉化水稻CYP81A6基因，獲得了抗苯達松和苯磺隆的油菜株系，為油菜的轉基因育種提供了種質資源。
　　 本研究主要內容包括：⑴以油菜下胚軸為外植體的轉化獲得了135個bastar抗性植株，PCR檢測結果表明其中的37株為陽性，陽性率為27.4％。⑵利用Southern雜交分析了陽性轉基因植株，結果顯示目的基因在油菜基因組中的拷貝數為1-4個，在6個植

3、株中是單拷貝插入的。⑶以β-actin為內參的半定量RT-PCR結果表明CYP81A6基因在所有轉基因株系中均能表達，且不同株系之間的表達量有差異。其中CYP81A6-1的表達量最低，株系CYP81A6-2的表達量最高。⑷待油菜長至4-5片真葉時，分別用不同濃度的苯達松和苯磺隆噴灑T1代植株，進行抗藥性鑒定。結果顯示非轉基因植株用濃度0.24g/L苯達松或1.0μg/ml苯磺隆處理時全部死亡，而轉基因植株用1.6g/L苯達松或5.0μg