農桿菌介導的抗除草劑基因轉化盾葉薯蕷的研究.pdf

1、分 類 號華 中農業(yè)大學碩 士學位論文農桿 菌介導 的抗 除草 劑 基 因轉 化盾 葉薯 預 的研 究Stu d yonP rod ueti onofH erb icid o resistantD toscoreazingi b erensisC .H .W ri gh tM ediatedby A 歲 obaeteriumtum ef a cicns研 究 生 : 史 磊指 導 教 師 : 姚 家 玲 教 授指 導 小 組 : 柳 俊

2、 教 授胡春 根 教 授周竹 青 教 授龍 鴻 副 教 授陳春 麗 副 教 授專 業(yè) : 植 物 學獲 得 學位 名稱 : 理 學 碩 士研 究 方 向 : 植 物 基 因工 程獲 得 學 位 時 間 : 20 10 年 6 月 20 日華 中農 業(yè) 大 學 生命 科 學 技 術 學 院二 O 一 O 年 六 月華 中農業(yè) 大學 20 10 屆碩 士研 究生學位 論文2. 2. 3. 2 盾 葉薯預胚 性愈傷對 篩選試 劑草甘 嶙 的敏

3、感性 實驗 . . . . . . . . . . . . … …232. 2. 3. 3 農桿 菌介 導 的盾 葉薯禎 遺傳 轉 化 . . . . . . … …， . . …、 . 、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……232. 2. 3. 4 轉 BA R 基 因和 五 尸 人 尸 ‘ 基 因再 生植 株 的 P C R 檢 測 . . . . . . . . . .

4、 . . . . . . … …242. 2 . 3. 5 轉 BA R 基 因再 生植 株 的 Southem 分 析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……253 結 果 與分 析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

5、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……283.1 不 同濃度 N A A 對胚性 愈傷 誘 導率 的影響 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

6、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . … …283. 2 高濃度 2， 4一 D 對胚 性愈傷 誘導率 的影 響 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……283. 3 植 物凝膠 對 愈

7、傷狀態(tài) 的影 響. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . … …， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . … …293. 4 千 燥 處 理 對 GF P 瞬 時表達 的影 響 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

8、 . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……293. 5 不 同 的菌 液 制 備 方法 對 G F P 瞬 時表 達 率 的影 響 ， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……313. 6 纖維素酶

9、和果膠 酶處理對轉 化 影 響 的初 步探 索 . . …… ， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . … …313. 7 盾 葉 薯 禎 胚 性 愈傷對 篩 選 劑 草 丁嶙 和 草甘 麟 的敏 感 性 實驗 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……323. 8 轉 基 因再 生植株 的獲 得 . . .

10、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……343. 9 再 生植 株 的 P C R 檢 測 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

11、 . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……363. 10 轉 BA R 基 因再 生植 株 的 Sout h em 分 析 . . . . . . . . ……， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……

12、， . . . . . . . . . ……364 討 論 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

13、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……384 . 1 再 生體 系 和 轉 化 體 系 的優(yōu) 化 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……

14、384 . 2 酶 處 理 提 高轉 化 效率 的可 行 性 …， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……384. 3 對 抗 除草 劑 BA R 基 因和 五 尹 S尸 ￡ 基 因 的看 法 . . . . . . . . . . .

15、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……394. 4 選 擇合 適 的篩選 劑濃度 是轉基 因成 功 的關鍵 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……394. 5 不 同基 因型 的農 桿 菌 對 轉

16、 化 的影 響 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……404. 6 抗 除草 劑 基 因轉 化 效 率 低 、假 陽性 多 的原 因分 析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

17、 . . . . . . . . . . . . ……40參 考 文 獻 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

18、 . . . . . . . . . . . . . . . . ……， …42致 謝 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .