2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、棉花屬于重要的經(jīng)濟作物,但是受土壤干旱和鹽堿化面積日益加大的影響,棉花的產(chǎn)量和品質明顯下降,給生產(chǎn)和經(jīng)濟帶來巨大損失。隨著生物技術的不斷發(fā)展,運用基因工程方法創(chuàng)制耐旱耐鹽堿棉花新材料、新種質,是目前棉花領域應用最廣泛,最有效的育種途徑。ERF(Ethylene responsive factor)類轉錄因子是植物特有的一類蛋白質分子,普遍參與調控植物對外界各種脅迫的應答反應。為了提高棉花對干旱和鹽堿的耐受能力,本研究利用農(nóng)桿菌介導法,將

2、分別從抗旱沙生植物胡楊(Populus euphratica Oliv.)和海水潮汐帶紅樹林植物秋茄(Kandelia candel(Linn.)Druce)中分離的PeDREB2a和KcERF轉錄因子基因構建在含CP4抗性標記基因的表達載體上并轉化棉花,對轉基因棉花進行鑒定與分析,獲得了一定數(shù)量的轉基因棉花株系,為棉花抗逆性的研究提供了一定的實驗材料。主要結果如下:
  (1)通過轉化擬南芥,從已構建好的5個表達載體中篩選出表達

3、性狀最佳、以rd29A為啟動子的雙價載體:pCAMBIA1302-KcERF-PeDREB2a,利用農(nóng)桿菌介導法將其導入陸地常規(guī)棉R15,經(jīng)培養(yǎng)基培育、嫁接、定植、溫室培養(yǎng)、PCR分子檢測,最終獲得32株轉基因棉花。
  (2)轉基因棉花通過冬季海南加代、夏季河北繼代,最終獲得T3代轉基因棉花株系。
  (3)對常規(guī)棉花R15進行不同濃度的Kanamycin(Kan)噴施處理,初步確定基其Kan抗性篩選濃度為1500 mg/

4、L,待T3代轉基因棉花長至4~5片真葉時,進行Kan噴施,初篩抗性棉株,剔除非抗性棉株。
  (4)對T3代初篩抗性棉株進行PCR、反轉錄PCR分子檢測,獲得6株轉基因棉花,通過Southern雜交分析得出,外源基因多以單拷貝的方式插入受體細胞基因組中,轉基因植株的遺傳遵循孟德爾遺傳定律,而且,子代無基因沉默現(xiàn)象。
  (5)對大田T3代轉基因棉花、以及對照組常規(guī)棉R15進行草甘膦噴施處理,轉基因棉花表現(xiàn)出良好的除草劑抗性,

5、而對照組幾乎全部死亡,證明抗除草劑基因CP4-epsps轉入棉花體內(nèi)并進行了表達。
  (6)室內(nèi)種植部分轉基因棉花株系,對其進行15%PEG6000和200mmol/LNaCl處理,觀察表型變化,同時通過干旱和鹽脅迫下相關生理指標的分析得出,干旱和高鹽脅迫下,轉基因棉花的長勢明顯優(yōu)與對照組,轉KcERF-PeDREB基因棉花體內(nèi)的MDA含量顯著低于對照組,CAT、SOD活性和游離脯氨酸含量均高于對照組,同時,與對照組相比,轉基因

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