灰葡萄孢BC1G_08931基因的功能研究.pdf

1、灰葡萄孢(Botrytis cinerea)所引起的灰霉病是一種世界性分布的重要植物病害，灰葡萄孢菌的寄主范圍非常廣泛，可侵染多種經濟作物和觀賞植物，造成嚴重的經濟損失?；颐共〉姆乐问寝r業(yè)生產上的難題之一，目前主要依賴化學農藥。從分子水平上探究灰葡萄孢菌的致病和發(fā)育等機理可為灰霉病的防治奠定基礎，本研究主要是利用基因沉默和超表達技術對BCIG08931的基因功能進行了初步研究，取得了如下研究結果：
　　 1、以本實驗室核盤菌表達

2、譜為基礎篩選出核盤菌SSIG_11468基因的同源基因BCIG_08931，該開放閱讀框含有829bp，含有2個外顯子，1個內含子。其cDNA序列全長741bp，編碼246個氨基酸，軟件預測顯示編碼蛋白有信號肽并具有DUF3129和DUF3988兩個的未知功能的保守結構域。RT-PCR結果表明該基因在菌絲的生長階段表達量較高，后期菌絲出現(xiàn)白色糾結時表達量開始有所下降，至形成菌核時表達量最低，結果說明該基因可能參與了灰葡萄孢的菌核形成過程

3、。
　　 2、分別構建了該基因的超表達載體和沉默載體，并通過農桿菌介導轉化出發(fā)菌株CanBC-3V得到了147個沉默轉化子和89個超表達轉化子，并通過PCR進行了驗證。RT-PCR結果表明，與出發(fā)菌株CanBC-3V相比，大部分的沉默/超表達轉化子中BC1G_08931基因的表達量均有所改變，選取表達量差異明顯的3個沉默轉化子和2超表達轉化子，通過Real-time PCR定量分析進一步進行了表達驗證。
　　 3、研究表

4、明沉默或超表達BC1G_08931基因對灰葡萄孢的菌絲和孢子形態(tài)無明顯影響，但沉默轉化子在產酸能力、菌絲生長速度、致病力和生物學產量方面均有不同程度的下降，而超表達轉化子在以上四個方面均有不同程度的升高，證實了BC1G_08931基因與這些生物學表型的相關性。沉默轉化子產菌核數(shù)目增多，菌核有所變小，而超表達轉化子則表現(xiàn)為數(shù)目減少，體積增大，結果說明BC1G_08931基因與菌核形成能力相關。
　　 4、在不同溫度下和不同碳源培養(yǎng)