PRRSV JL-07-SW分離株GP5基因克隆與原核表達.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、根據(jù)PRRSV美洲型毒株VR-2332株的基因序列，設計了GP5基因特異性引物P1/P2，利用RT-PCR擴增出PRRSV JL/07/SW分離株GP5基因，以pMD18-T為載體對GP5基因進行克隆。序列測定表明，GP5基因全長603bp，編碼201個氨基酸；序列分析表明，GP5基因與VR-2332株和LV株核苷酸同源性分別為91.6％及48.7％，編碼氨基酸同源性分別為87.6％及60.0％。 將GP5基因亞克隆到pGEX-

2、4T-1表達載體中，構(gòu)建表達質(zhì)粒pGEX-4T-GP5。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21(DE3)中，用IPTG進行誘導表達，結(jié)果表達出約48KDa融合蛋白，蛋白大小與預期相符，經(jīng)Westem-blot免疫印跡分析，重組蛋白與抗PRRSV的陽性血清發(fā)生特異性反應，表明其具有抗原活性。 用重組表達融合GP5蛋白作為包被抗原，建立了診斷PRRS的間接ELISA方法。實驗確定了最佳抗原包被濃度為2.30μg/mL，PRRSV陽性血清稀

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