PRRSV寧夏株的分離鑒定及其ORF5、Nsp2基因的克隆與序列分析.pdf

1、2006年夏秋季節(jié)，寧夏地區(qū)豬群出現(xiàn)了以高熱、厭食或不食、眼結膜炎、咳嗽、氣喘等呼吸道癥狀、后軀無力不能站立或搖擺等神經(jīng)癥狀以及高死亡率為主要臨床特征的一種新的傳染病，鑒于其對經(jīng)濟和國民生活產(chǎn)生的巨大影響，診斷、分離和鑒定該病原以發(fā)現(xiàn)有效的監(jiān)測方法和控制策略是非常必要的。因此，本試驗進行了以下基礎研究。
　　 1.病毒的分離鑒定：本研究通過從寧夏中衛(wèi)、吳忠、石嘴山、銀川的部分發(fā)病豬場采集產(chǎn)生典型病變的肺部組織，將病料處理后分別用

2、Marc-145、PK-15、BHK-21等傳代細胞系進行病毒的分離鑒定，結果只在Marc-145細胞上有典型病變，連續(xù)傳代3次后病變穩(wěn)定，接毒48h～72h后病變可達70％左右。由此成功地分離到18株PRRSV寧夏毒株，并通過RT-PCR檢測其Nsp2基因高變區(qū)，結果在其第480位和第531～559位共缺失30個氨基酸，證實為PRRSV變異毒株。
　　 2.基因的克隆與序列分析：利用RT-PCR技術，對18株PRRS陽性分離毒

3、株進行ORF5基因擴增、測序。應用DNAStar軟件分析所測序列，并與ATCC VR2332，BJ-4，RespPRRS MLV等毒株的ORF5序列進行比較，其核苷酸同源性分別為85.9％～89％，85.4％～88.5％，85.8％～88.9％，與CH-la之間的核苷酸同源性為90％～98.2％，與歐洲代表LV株的核苷酸同源性為55.9％～56.6％?；蛳到y(tǒng)發(fā)育樹分析表明，發(fā)生于寧夏回族自治區(qū)的PRRSV屬于美洲型，與CH-la遺傳關