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文檔簡介
1、本研究根據(jù)GeneBank上公布的豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）核衣殼蛋白（N）基因及GP5—M復(fù)合基因核苷酸序列設(shè)計合成兩對特異性引物，在兩對引物的5’端分別加有限制性內(nèi)切酶位點。用RT—PCR方法擴增出PRRSV的核衣殼蛋白（N）基因及GP5—M復(fù)合基因，擴增出的DNA片段大小與預(yù)期的片段大小相符。并將其分別克隆到原核表達(dá)載體pGEX—4T-1上，得到重組質(zhì)粒pGEX—4T-1—N、pGEX—4T-1—GP5。 重組質(zhì)
2、粒pGEX—4T-1—N轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL31（DE3）感受態(tài)細(xì)胞，經(jīng)TPTG誘導(dǎo)，SDS—PAGE電泳分析，結(jié)果表明得到分子量約為39.866Da的融合蛋白，經(jīng)超聲波破碎處理后，SDS—PAGE電泳分析其為可溶性蛋白，為以后蛋白的大量純化及后續(xù)實驗奠定了基礎(chǔ)。 加有酶切位點的信號肽（SEC）序列由上海生物工程有限公司合成，SEC序列及pGEX—4T-1—GP5質(zhì)粒同時進(jìn)行BamHI和EcoRI雙酶切，用T4連接酶進(jìn)行連接，連接產(chǎn)
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