2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、花椰菜是十字花科蕓薹屬甘藍(lán)種中以花球?yàn)楫a(chǎn)品的一個(gè)變種,具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。但在栽培過(guò)程中,黑腐病的大流行會(huì)使蔬菜品質(zhì)嚴(yán)重下降,造成大幅度減產(chǎn),使得針對(duì)該病成因及預(yù)防的研究成為科學(xué)家關(guān)注的熱點(diǎn)。但是目前對(duì)植物抗黑腐病的研究進(jìn)展主要集中在該病的遺傳規(guī)律,以及對(duì)致病菌侵染的應(yīng)答模式等方面,而在分子水平上對(duì)于抗黑腐病基因的研究卻很少。本論文通過(guò)篩選抗黑腐病基因相關(guān)分子標(biāo)記,同時(shí)結(jié)合電子克隆技術(shù)尋找候選的抗病基因,該研究對(duì)推進(jìn)防治黑腐病的進(jìn)程具有

2、重要理論意義和應(yīng)用價(jià)值。本文以花椰菜抗感黑腐病一對(duì)近等基因系為實(shí)驗(yàn)材料,在抗黑腐病基因篩選的研究中,首次將ISSR分子標(biāo)記與電子克隆技術(shù)相結(jié)合,獲得一個(gè)與花椰菜抗黑腐病相關(guān)候選基因BRR-C,然后采用Southern雜交技術(shù)證明了BRR-C在抗、感花椰菜黑腐病材料中的多態(tài)性。進(jìn)一步將RT-PCR技術(shù)與RQ-PCR技術(shù)相結(jié)合,相應(yīng)于菌體脅迫前后以及時(shí)間長(zhǎng)度的變化,在抗、感花椰菜黑腐病材料中觀察到與預(yù)期相符的BRR-C表達(dá)趨勢(shì),從而推測(cè)BR

3、R-C很可能參與了花椰菜抗黑腐病的防衛(wèi)機(jī)制,并對(duì)BRR-C可能參與的抗病機(jī)制進(jìn)行了探討。同時(shí)根據(jù)ISSR分子標(biāo)記及BRR-C序列設(shè)計(jì)了三對(duì)SCAR標(biāo)記引物,這對(duì)分子標(biāo)記技術(shù)輔助抗性育種的應(yīng)用具有重要意義。主要結(jié)果如下:
   ⑴應(yīng)用ISSR分子標(biāo)記技術(shù),從近等位基因系材料中篩選得到了兩條差異明顯且重復(fù)性好的條帶,即ISSR21200,ISSR17800。經(jīng)過(guò)克隆測(cè)序后分析發(fā)現(xiàn),ISSR17800與Brassica napus v

4、at.napus的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶(AJ245479)具有93%的同源性;而ISSR21200與擬南芥中的一段EST序列(AK228713,hypothetical protein)有85%的同源性。
   ⑵利用分子標(biāo)記ISSR21200作為種子序列,通過(guò)電子克隆技術(shù)獲得抗黑腐病候選基因BRR(black rot resistance candidate genes)。隨后依據(jù)BRR設(shè)計(jì)特異引物,在花椰菜基因組中分離到1

5、條候選基因BRR-C(black rot resistance candidategenes of cauliflower),經(jīng)過(guò)克隆測(cè)序后分析發(fā)現(xiàn),該序列全長(zhǎng)2204bp,包含2個(gè)外顯子和2個(gè)內(nèi)含子,共編碼484個(gè)氨基酸,與擬南芥逆轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子的逆轉(zhuǎn)錄酶基因存在高同源性。
   ⑶采用Southern雜交技術(shù),將BRR-C與抗、感花椰菜黑腐病基因組進(jìn)行雜交,結(jié)果表明BRR-C在抗、感病性材料中存在明顯多態(tài)性,并且在花椰菜基因組中

6、以低拷貝形式存在。
   ⑷依據(jù)BRR-C含有的保守序列設(shè)計(jì)一對(duì)特異引物,進(jìn)行RT-PCR分析,結(jié)果表明BRR-C在脅迫條件下表達(dá)豐度提高。隨后以不同時(shí)間段XCC脅迫的近等位基因系為材料,進(jìn)行RQ-PCR(real-time-quantimtive PCR)分析,結(jié)果表明花椰菜中BRR-C的表達(dá)確實(shí)受到XCC的誘導(dǎo)。因此,我們認(rèn)為BRR-C參與了花椰菜抗黑腐病的防衛(wèi)機(jī)制,這為進(jìn)一步克隆花椰菜抗黑腐病基因提供了可靠的候選基因。

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