花椰菜抗病相關(guān)基因OXO與CHS的克隆及功能分析.pdf

1、十字花科蔬菜菌核病,是由核盤菌（Sclertinia sclerotiorum）引起的一種病害，每年造成巨大的經(jīng)濟損失，查爾酮合成酶(Synthetase chalconeCHS）是苯丙氨酸代謝途徑的關(guān)鍵酶，合成的查爾酮為類黃酮提供基本碳骨架，在植物的抗病性中起到重要作用。草酸氧化酶(oxalate oxidaseOXO）在生物界降解草酸的過程中起到十分重要的作用，它通過降解草酸，產(chǎn)生H2O2和CO2，在植物的抗病防御中發(fā)揮重要功能。<

2、br>　　本研究以花椰菜和擬南芥為材料，采用同源克隆的方法從花椰菜中克隆了CHS和OXO基因，對OXO基因進行生物信息學(xué)分析，并將他們轉(zhuǎn)入擬南芥與花椰菜，探究CHS和OXO基因在植物抗病性與生長發(fā)育中的作用。
　　1.成功的克隆了花椰菜OXO和CHS基因DNA與cDNA全長，序列分析顯示，花椰菜OXO基因編碼206個氨基酸,屬于cupin家族。BoOXO氨基酸序列與油菜、擬南芥germin-like蛋白同源性達97％與88％，Bo

3、OXO蛋白為疏水性蛋白，無跨膜區(qū)。
　　2.成功構(gòu)建植物表達載體pC3301-BoOXO與pC3301-BoCHS，并用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法成功轉(zhuǎn)入擬南芥與花椰菜，經(jīng)過Basta抗性篩選，分子鑒定，獲得BoOXO轉(zhuǎn)基因陽性擬南芥2株，花椰菜16株；得到BoCHS轉(zhuǎn)基因陽性擬南芥3株，花椰菜7株。
　　3. T3代擬南芥的表型分析顯示，異位表達BoOXO基因，可促進擬南芥?zhèn)雀纳L，葉片、花與果莢的增大，提高結(jié)實率；異位表達BoCHS