芝麻抗莖點(diǎn)枯病NBS類抗病相關(guān)基因的克隆與分析.pdf

1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterCloningandAnalysisofNBStyperesistancegenesinsesameagainstMacrophominaphaseolinapathogenByMuYuSupervisor：ProfBaomingTian，HongyanLiuCropGeneticsandBreeding1一、●●●BlOe

2、nglneenngDepartmentMay2013摘要摘要芝麻是我國重要的油料作物之一，在芝麻生長過程中芝麻莖點(diǎn)枯病是嚴(yán)重威脅芝麻生產(chǎn)的一種真菌性病害。在芝麻病害防治上，除了化學(xué)防治，種植抗病品種是一種安全、有效的防病措施，但芝麻生產(chǎn)中可供利用的抗病品種還很少，所以克隆抗病基因，研究抗病機(jī)理，對于加快芝麻抗病育種進(jìn)程具有重要意義。本研究利用前期獲得的芝麻抗莖點(diǎn)枯病NBSRGAs與河南省芝麻研究中心提供的EST序列比對結(jié)果設(shè)計(jì)特異引物，

3、從不同抗性的芝麻品種中克隆抗病相關(guān)基因。選擇高抗莖點(diǎn)枯病的芝麻品種“商水農(nóng)家種”，及感病的芝麻品種“冀9014”、“和尚頭“，設(shè)置接莖點(diǎn)枯病菌及不接菌處理，利用qRTPCR技術(shù)分析了已克隆的基因表達(dá)模式，結(jié)果如下：1芝麻抗莖點(diǎn)枯病相關(guān)基因的克隆選取1l份對莖點(diǎn)枯病具有不同抗性的芝麻品種為材料，利用PCR技術(shù)，得到21個(gè)RGA基因，GenBank登錄號分別為KC477692～KC477707、KC771241～KC771243，它們編碼的

4、氨基酸序列均具有NBS類型抗病基因編碼蛋白的共有特征結(jié)構(gòu)域P100p和NB—ARC結(jié)構(gòu)。BLASTX分析結(jié)果表明，21個(gè)RGA的部分編碼蛋白序列與已知的含有NBARC信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)、NBS—LRR類型抗病基因等的編碼蛋白同源性為35％～52％。利用MEGA40聚類分析發(fā)現(xiàn)這21個(gè)RGA基因聚為4類，分別命名為SIRGAl、SIRGA2、SIRGA8、SIRGAl2。2芝麻抗莖點(diǎn)枯病相關(guān)基因的表達(dá)模式分析實(shí)時(shí)分析已克隆基因在莖點(diǎn)枯

5、病菌誘導(dǎo)下親和組合與非親和組合中72h內(nèi)的表達(dá)模式，結(jié)果表明：葉部組織中，除了SIRGA6只在親和組合中受到了誘導(dǎo)表達(dá)，其余在親和組合及非親和組合中均受到了誘導(dǎo)表達(dá)，其中SIRGAl、4、11、12基因在親和組合中的表達(dá)量高于非親和組合中的表達(dá)量，SIRGA2、8基因在非親和組合中的表達(dá)量要高于親和組合，S1RGA7基因在非親和組合和親和組合中表達(dá)量無明顯差異。莖部組織中SIRGAl、2、4、11、12均受莖點(diǎn)枯病菌的誘導(dǎo)表達(dá)上調(diào)，且在