山東地區(qū)死亡鴨胚中細(xì)菌分離鑒定及沙門氏菌耐藥性與毒力基因檢測.pdf

1、沙門氏菌是一種重要的食源性致病菌，具有廣泛的宿主性，作為人畜共患病其成為危害養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展最為嚴(yán)重的病原菌之一，尤其在種鴨養(yǎng)殖過程中沙門氏菌可以通過種蛋垂直傳播。
　　自2014年至2016年，山東規(guī)?；N鴨孵化場的胚胎死亡率和弱雛率明顯升高，并且死亡鴨胚的類型以臭蛋為主，初步懷疑是大面積細(xì)菌感染所致。由于抗菌藥物在畜禽疾病防治中的大量使用，使得沙門氏菌對抗生素的耐藥率不斷上升，特別是多重耐藥現(xiàn)象的不斷出現(xiàn)，給沙門氏菌病的有效防治帶來

2、了困難。本實(shí)驗(yàn)旨在研究死亡鴨胚中病原菌的感染狀況，以探究鴨胚在孵化過程中死亡原因；通過藥敏試驗(yàn)和耐藥基因檢測，初步掌握鴨源沙門氏菌在山東的耐藥情況，探究耐藥情況與臨床常用抗菌藥的相互關(guān)系，為指導(dǎo)生產(chǎn)中種鴨的合理用藥提供理論依據(jù)；分析鴨源沙門氏菌毒力基因，對沙門氏菌致病性影響，研發(fā)安全有效的疫苗奠定基礎(chǔ)。
　　本研究共分四部分。
　　1.死亡鴨胚中細(xì)菌的分離鑒定
　　通過對無破損的死亡鴨胚進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)、形態(tài)染色、16

3、SrDNA鑒定等方法，從12個(gè)批次，315枚鴨胚中共分得細(xì)菌282株，分屬26個(gè)種，其中245枚存在細(xì)菌感染，感染率為77.8％。在分離的所有細(xì)菌中，大腸桿菌、沙門氏菌和奇異變形桿菌分別占38.30%（108/282）、26.24%（74/282）和8.16%（23/282），是死亡鴨胚中的主要致病菌群。結(jié)果表明，造成種鴨孵化場胚胎死亡率和弱雛率明顯升高的主要原因是細(xì)菌感染所致，且沙門氏菌是主要的致病菌之一。
　　2.鴨源沙門氏菌

4、耐藥性調(diào)查
　　采用K-B法對74株鴨源沙門氏菌進(jìn)行17種抗生素（氨基糖苷類藥物、喹諾酮類藥物、β-內(nèi)酰胺類藥物等）的耐藥性檢測。結(jié)果顯示，74株沙門氏菌對17種抗生素表現(xiàn)出不同程度的耐藥：β-內(nèi)酰胺類藥物的耐藥性較高，氨芐西林耐藥率31.08%，頭孢噻吩耐藥率29.73%；氨基糖苷類藥物中慶大霉素的耐藥率最高占22.97%，其次是鏈霉素9.46%和卡那霉素2.70%；喹諾酮類藥物耐藥率較低，環(huán)丙沙星和諾氟沙星耐藥率均為4.05%

5、，氧氟沙星耐藥率為2.70%；四環(huán)素和氯霉素類藥物耐藥率均較低分別為5.41%和4.05%。在分離的74株沙門氏菌中兩種藥物以上多重耐藥菌株的耐藥率占78.37%。該項(xiàng)研究調(diào)查表明，在治療和預(yù)防山東地區(qū)種鴨孵化場致病性細(xì)菌感染時(shí)可以選擇性配合使用喹諾酮類藥物和卡那霉素，在選擇使用喹諾酮類藥物時(shí)，要按照生產(chǎn)具體情況和藥物使用說明書嚴(yán)格控制劑量。
　　3.鴨源沙門氏菌耐藥基因的檢測與鑒定
　　對鑒定的74株沙門氏菌進(jìn)行氨基糖苷類

6、鈍化酶基因三重PCR檢測，該74株沙門中有13株擴(kuò)增出ant(3’’)-Ia、aac(6’)-Ib、aph(3’)-IIa的特異性條帶，三重基因攜帶率17.56%，16S甲基化酶基因未檢出；喹諾酮類耐藥菌株P(guān)CR擴(kuò)增結(jié)果表明，qnrS基因攜帶率14.85%，oqxA基因攜帶率9.46%，oqxB基因攜帶率2.70%，qnrA、qnrB、qnrC和qnrD基因未檢出；β-內(nèi)酰胺類耐藥基因TEM基因攜帶率27.03%。本研究結(jié)果表明氨基糖苷

7、類鈍化酶基因、喹諾酮基因和β-內(nèi)酰胺基因廣泛存在于鴨源沙門氏菌中，其耐藥性與檢測的耐藥基因符合率存在差異不呈顯著的相關(guān)性。
　　4.鴨源沙門氏菌毒力基因的檢測與鑒定
　　對鑒定的74株沙門氏菌進(jìn)行8種毒力基因PCR檢測，SPI-1、SPI-3、SPI-4、SPI-5、stn和invJ的檢出率分別是81.19%、94.59%、94.59%、79.73%、100%和66.22%。SPI-2和fim未檢出。74株沙門氏菌中，僅攜帶