AcrAB外輸泵介導的雞沙門氏菌耐藥性研究.pdf

1、沙門氏菌是醫(yī)學和獸醫(yī)學臨床感染中最常見的病原菌之一。雞沙門氏菌是危害我國養(yǎng)禽業(yè)健康發(fā)展的重要病原菌之一。目前主要使用抗菌藥物對該病進行預防和治療。氟喹諾酮類藥物為一類化學合成的廣譜、高效、低毒的抗菌藥物。隨著該類藥物的長期和不當使用，其耐藥性也隨之廣泛產生，且耐藥率逐年增高。耐藥性的產生導致預防和治療失敗，給養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大經濟損失。研究表明，雞沙門氏菌對各種抗菌藥物產生耐藥性與主動外輸系統(tǒng)(外輸泵)密切相關。其中AcrAB-TolC外輸

2、泵是最主要外輸泵，包括藥物質子轉運子AcrB、周質融合蛋白AcrA和外膜通道蛋白TolC。acrA基因和acrB基因由一個操縱子調控，AcrAB在機能上是統(tǒng)一的，因此，其活動性基本可以反映整個外輸泵的活動性。 本試驗采用試管二倍稀釋法通過體外誘導試驗，獲得對氟喹諾酮類藥物環(huán)丙沙星不同水平的5株雞沙門氏菌耐藥菌株(分別為16×MIC、32×MIC、64×MIC、128×MIC、256×MIC，MIC為0.5μg-mL-1)。采用K

3、irby-Bauer紙片法測定上述耐藥菌株對10種抗菌藥物的敏感性，試驗結果表明，5株耐藥菌株均為多重耐藥菌株，對氟喹諾酮類、四環(huán)素、復方磺胺的耐藥率均為100％；128×MIC、256×MIC耐藥菌株對氨芐西林和頭孢唑啉也表現(xiàn)為耐藥；但誘導的耐藥菌株對卡那霉素，慶大霉素等仍敏感。從以上結果可見，雞沙門氏菌對多數(shù)抗菌藥物的耐藥率都較高；且氟喹諾酮類藥物存在交叉耐藥現(xiàn)象。以氰氯苯腙(CCCP)作為能量抑制劑，使菌株處在低能狀態(tài)，用紫外分光

4、光度法檢測它們在能量正常及抑制狀態(tài)下對氟喹諾酮類藥物環(huán)丙沙星攝取的速率。結果顯示，當無CCCP時，耐藥菌株菌體內環(huán)丙沙星濃度低于敏感株；而當有CCCP存在時，菌體內環(huán)丙沙星濃度隨攝取時間而遞增，與無CCCP存在時相比，保持明顯高的穩(wěn)態(tài)濃度；而質控菌株C79-13，由于外輸泵的作用不占主導，所以，不論有無CCCP存在，菌體內環(huán)丙沙星濃度隨攝取時間而遞增，且保持較耐藥菌株明顯高的穩(wěn)態(tài)濃度。初步證明耐藥菌株存在外輸泵機制。Girud等人研究表

5、明，沙門氏菌存在由AcrAB外輸泵介導的耐藥機制，外輸泵的活動性與耐藥性水平有一定的相關性。本試驗16×MIC、64×MIC、128×MIC耐藥菌株進行acrA基因的克隆及序列分析，發(fā)現(xiàn)與質控菌株相比，16×MIC耐藥菌株有一處發(fā)生氨基酸殘基取代，即M-40→T(Met→Thr)；64×MIC耐藥菌株有一處發(fā)生氨基酸殘基取代，即R-131→C(Arg→Cys)；128×MIC耐藥菌株沒發(fā)生取代。研究提示了雞沙門氏菌acrA基因突變并不是