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文檔簡介
1、沙門氏菌是引起食源性疾病的常見病原菌之一,每年全球因感染沙門氏菌而引起胃腸炎的患者高達9380萬,其中死亡人數(shù)約15.5萬,且大部分的疫情爆發(fā)是通過被沙門氏菌污染的食物或者動物傳播的,嚴重威脅公共衛(wèi)生健康問題,并且造成了巨大的經(jīng)濟損失。目前沙門氏菌共發(fā)現(xiàn)2500多種血清型,鼠傷寒沙門氏菌是常見血清型之一,由鼠傷寒沙門氏菌在全球范圍內(nèi)引起的肆虐感染事件也令人印象深刻。因此,本研究開展了對上海市鼠傷寒沙門氏菌的病原監(jiān)測及相關(guān)的研究。
2、 從2011年1月至2014年12月共收集上海市鼠傷寒沙門氏菌641株,其中食源性菌株82株,臨床來源菌株559株。臨床來源菌株分析顯示,各年齡段人群均有感染者,但是5歲以下兒童,尤其是一歲以內(nèi)兒童更易感染鼠傷寒沙門氏菌,占感染者的49.4%,男性患者與女性患者的比例為1.3:1,每年鼠傷寒沙門氏菌感染高峰集中在夏秋兩季。
為分析上海市鼠傷寒沙門氏菌的耐藥特點,本研究對收集來的所有菌株進行了抗生素敏感性檢測。結(jié)果顯示,菌株對
3、傳統(tǒng)抗生素均表現(xiàn)很高的耐藥率,從高到低依次為四環(huán)素(85%)、萘啶酸(81.6%)、氨芐西林(81.1%)、磺胺異噁唑(79.3%)、氯霉素(58.2%)、鏈霉素(54.6%)、甲氧芐氨嘧啶/磺胺甲噁唑(50%)和慶大霉素(39.8%)。此外,在氟喹諾酮類藥物中,對環(huán)丙沙星的耐藥率為12.8%;在頭孢類藥物中,對頭孢噻呋,頭孢曲松和頭孢西丁的耐藥率分別為17.6%、17.6%和4.4%;在大環(huán)內(nèi)酯類藥物中,阿奇霉素的耐藥率為5%。食源性
4、菌株和臨床來源菌株耐藥性結(jié)果比較顯示,食源性菌株對萘啶酸、四環(huán)素、慶大霉素、氯霉素、磺胺異噁唑和甲氧芐氨嘧啶/磺胺甲噁唑的耐藥率高于臨床來源菌株,但臨床來源菌株對頭孢噻呋,頭孢曲松和頭孢西林耐藥性高于食源性菌株,兩者對環(huán)丙沙星和阿奇霉素的耐藥性無明顯差異。值得關(guān)注的是,僅有26株菌對所有抗生素均敏感,多重耐藥菌株高達86.1%,對≥3、≥4、≥5、≥6和≥7類抗生素產(chǎn)生耐藥的比例依次為86.1%、79.9%、64.3%、41.3%和0.
5、9%,其中30.4%的菌株耐藥譜為 ACSSuT(氨芐西林、氯霉素、鏈霉素、磺胺異噁唑和四環(huán)素)。此外還發(fā)現(xiàn)22株多重耐藥菌株對頭孢類藥物和環(huán)丙沙星同時耐藥,其中6株菌對阿奇霉素同時耐藥。如果這些多重耐藥菌株像DT104型菌株一樣在全球廣泛傳播的話后果不堪設(shè)想,應(yīng)該引起我們高度重視。通過上述藥敏結(jié)果分析,為上海市臨床使用抗生素治療鼠傷寒沙門氏菌感染提供依據(jù),并提醒我們應(yīng)合理規(guī)范使用抗生素,避免耐藥菌株數(shù)量繼續(xù)增加。
為研究鼠傷
6、寒沙門氏菌對頭孢類藥物、環(huán)丙沙星和阿奇霉素的耐藥機制,本研究對這三類藥物常見的耐藥基因進行了PCR檢測。在82株耐環(huán)丙沙星的鼠傷寒沙門氏菌中,76株菌的gyrA基因存在單位點突變(Asp87Asn/Tyr)或者雙位點突變(Ser83Phe,Asp87Asn/Gly),其中6株菌同時存在parC單點突變(Ser80Arg),1株菌同時存在parC雙位點突變(Thr57Ser,Ser80Arg)。所有菌株gyrB和parC均未發(fā)生位點突變。
7、質(zhì)粒介導的喹諾酮類藥物耐藥基因(PMQR)結(jié)果顯示,54(65.9%)菌株含有aac(6’)-Ib-cr基因,6(7.3%)株菌含有qnrB基因,其中2株為qnrB2,4株為qnrB4,僅1株菌含有qnrS1。值得關(guān)注的是有53株菌的gyrA基因有一個或者沒有突變位點,但均帶有一種以上PMQR,說明PMQR基因在介導鼠傷寒沙門氏菌對環(huán)丙沙星耐藥中有流行的趨勢。在116株耐頭孢類藥物的鼠傷寒沙門氏菌中,廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)基因普
8、遍存在,其中 blaCTX-M、blaTEM-1、blaOXA-1和blaSHV-12陽性率分別為64.7%、44.8%、37.1%和2.6%。blaCTX-M共檢測到8種型別:blaCTX-M-14、blaCTX-M-15、blaCTX-M-27、blaCTX-M-55、blaCTX-M-65和blaCTX-M-104, blaCTX-M-123和blaCTX-M-125,均屬于blaCTX-M-1群和blaCTX-M-9群,未檢出b
9、laCTX-M-2/8/25基因,陽性率最高的為blaCTX-M-14和 blaCTX-M-55,分別占29%和41%,此外blaCTX-M-123和 blaCTX-M-125基因在鼠傷寒沙門氏菌中首次發(fā)現(xiàn)。在32株耐阿奇霉素鼠傷寒沙門氏菌中,有15株MIC≥128μg/mL,均檢測到mphA基因,而其余17株MIC值為16-64μg/mL,均未檢測到mphA基因,其余大環(huán)內(nèi)酯類耐藥基因mphB、ermA、ermB、ereA、mefA和
10、msrA在32株菌中均未發(fā)現(xiàn),推測mphA基因可能介導鼠傷寒沙門氏菌對阿奇霉素的高水平耐藥。在22株共同耐頭孢類藥物和環(huán)丙沙星的鼠傷寒沙門氏菌中,共15株菌同時帶有ESBLs和PMQR基因,其中還有2株菌對阿奇霉素產(chǎn)生共同耐藥,攜帶耐藥基因為aac(6’)-Ib-cr/ blaCTX-M/blaTEM/ mphA。這些質(zhì)粒介導的耐藥基因極易在細菌間水平傳播,造成細菌的多重耐藥,因此應(yīng)積極關(guān)注這些基因的播散,并研究其傳播機制和途徑等,阻止
11、它們的擴散。
為了進一步了解上海市鼠傷寒沙門氏菌的親緣關(guān)系及遺傳多態(tài)性,本研究利用脈沖場凝膠電泳(PFGE)方法對257株鼠傷寒沙門氏菌進行了基因分型,聚類分析結(jié)果顯示食源性菌株與臨床來源菌株親緣關(guān)系相近,在 A簇中兩種來源菌株之間帶型相似度為85%,說明食源性菌株是人類感染鼠傷寒沙門氏菌的重要環(huán)節(jié)。對耐頭孢類藥物、環(huán)丙沙星和阿奇霉素的菌株進行了基因分型,聚類分析結(jié)果顯示對這三類藥物耐藥的菌株帶型復雜,遺傳多態(tài)性明顯,帶型為C
12、EP.022的菌株均帶有blaCTX-M和blaTEM基因,且2011-2014年均有分布,表明此帶型菌株親緣關(guān)系極近,來自同一克隆群,且這些菌株均對7種以上抗生素耐藥,所以極易引起廣泛傳播,應(yīng)對此類型菌株加強監(jiān)控,其余耐藥基因與菌株基因分型無明顯相關(guān)性。
綜上所述,本研究分析了上海市2011-2014年鼠傷寒沙門氏菌的耐藥特點,闡述了菌株對頭孢類藥物、氟喹諾酮類藥物和阿奇霉素的耐藥機制,并利用脈沖場凝膠電泳對耐藥菌株進行基因
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