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1、本試驗(yàn)以糙皮側(cè)耳(Pleurotus ostreatus)4個(gè)栽培菌株HP(華平特白)、PG30(平高30)、JG3(姬菇3號(hào))、PG981(平菇981)為試驗(yàn)材料,采用單單雜交與雙單雜交兩種不同雜交方式獲得雜交子進(jìn)行育種試驗(yàn),經(jīng)過(guò)秋栽和春栽篩選農(nóng)藝性狀優(yōu)良的雜交子。野外采集得到兩野生菌株子實(shí)體并進(jìn)行組織分離,基于ITS序列分析對(duì)兩野生菌株進(jìn)行鑒定,期望能馴化栽培出菇獲得新的種質(zhì)資源。
以鎖狀聯(lián)合為遺傳標(biāo)記,利用原生質(zhì)體單
2、核化技術(shù)得到4個(gè)栽培菌株兩種不同交配型的單核體,用單單雜交與雙單雜交兩種不同雜交方式將4個(gè)栽培菌株之間相互進(jìn)行完全配對(duì)雜交,結(jié)合拮抗試驗(yàn)和ISSR分子標(biāo)記鑒定雜交子。運(yùn)用灰色關(guān)聯(lián)度法對(duì)供試菌株的8個(gè)農(nóng)藝性狀進(jìn)行綜合比較,結(jié)合鮮菇總產(chǎn)量鄧肯多重比較篩選雜交子?;贗TS序列構(gòu)建兩野生菌株的同源進(jìn)化樹(shù),對(duì)兩野生菌株進(jìn)行鑒定。對(duì)未能出菇的張家界野生菌株利用原生質(zhì)體技術(shù)再生出雙核體,將再生雙核體萌發(fā)的雙核菌絲進(jìn)行馴化栽培出菇試驗(yàn)。
3、 試驗(yàn)結(jié)果表明,華平特白、平高30、平菇981兩種交配型單核體的比例存在偏分離現(xiàn)象。4個(gè)供試菌株的8個(gè)單核體相互完全配對(duì)雜交,結(jié)合與雙親本的拮抗試驗(yàn)單單雜交配對(duì)得到13個(gè)雜交子。正反雙單雜交完全配對(duì)得到13個(gè)雜交子。運(yùn)用ISSR分子標(biāo)記對(duì)雜交子進(jìn)行了遺傳分析,從40個(gè)引物中篩選出5個(gè)條帶重復(fù)性好、譜帶清晰的引物,擴(kuò)增結(jié)果采用軟件NTSYS2.10e計(jì)算菌株間的遺傳相似系數(shù),并進(jìn)行聚類(lèi)分析。聚類(lèi)結(jié)果顯示33個(gè)雜交子GS值變化范圍0.31~
4、0.94,進(jìn)一步驗(yàn)證了雙單雜交子的可靠性?;疑P(guān)聯(lián)度與鮮菇產(chǎn)量鄧肯多重比較結(jié)果確定了雜交菌株27號(hào),26號(hào)、19號(hào)、37號(hào),28號(hào)、30號(hào)等6個(gè)優(yōu)良雜交子,春季栽培觀察結(jié)果顯示該6個(gè)雜交菌株性狀表現(xiàn)穩(wěn)定。采用PCR產(chǎn)物克隆測(cè)序獲得兩野生菌株ITS序列,測(cè)序后與其相似系數(shù)最高的前10位菌株進(jìn)行同源性分析,鑒定出武當(dāng)山野生菌株為佛羅里達(dá)側(cè)耳,張家界野生菌株為鳳尾菇。
上述研究表明單單雜交及雙單雜交均可獲得農(nóng)藝性狀優(yōu)于親本的雜交
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