版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、糙皮側(cè)耳(P.ostreatus)是我國(guó)栽培量最廣、消費(fèi)量最大的食用菌。糙皮側(cè)耳子實(shí)體成熟過(guò)程中會(huì)彈射大量孢子,數(shù)量巨大的孢子不僅會(huì)降低子實(shí)體的品質(zhì),還會(huì)引起菇農(nóng)的―蘑菇肺‖。選育無(wú)孢糙皮側(cè)耳菌株對(duì)解決孢子引起的過(guò)敏反應(yīng)具有重要作用。
本文將肺形側(cè)耳(Pleurotus pulmonarius)產(chǎn)孢相關(guān)基因stpo1的基因序列,與糙皮側(cè)耳轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì),得到糙皮側(cè)耳中與其同源的基因,并將獲得的基因命名為stpo1。通過(guò)反
2、轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)的方法,克隆得到了stpo1的CDS全長(zhǎng)序列;對(duì)目的基因進(jìn)行了生物信息學(xué)分析;在轉(zhuǎn)錄水平對(duì)stpo1進(jìn)行表達(dá)模式分析;利用pEASY-E2原核表達(dá)系統(tǒng)對(duì)stpo1進(jìn)行原核表達(dá);構(gòu)建了糙皮側(cè)耳stpo1過(guò)表達(dá)以及RNA干擾表達(dá)載體,以期通過(guò)對(duì)stpo1基因過(guò)表達(dá)或者沉默來(lái)研究stpo1基因與糙皮側(cè)耳孢子形成的關(guān)系。本文主要研究結(jié)果如下:
1、以糙皮側(cè)耳子實(shí)體為材料,采用反轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)克隆出糙皮側(cè)耳產(chǎn)孢
3、相關(guān)基因stpo1的CDS區(qū)(長(zhǎng)度為2,556bp);并以基因組為模板克隆出該基因的gDNA(長(zhǎng)度為3,853bp)。Genbank登錄號(hào)為KR822419。對(duì)其基因結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)該基因擁有25個(gè)內(nèi)含子。stpo1與stpp1、PC9v1.0同源基因、PC15v2.0同源基因的CDS區(qū)核酸序列比對(duì)結(jié)果顯示,stpo1與上述三個(gè)同源基因分別具有88%、97%、99%的一致性。
2、STPO1蛋白的結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)結(jié)果顯示,該蛋白屬于
4、DNA錯(cuò)配修復(fù)MSH家族基因,具有該家族蛋白中典型的MutS結(jié)構(gòu)域、ATP結(jié)合位點(diǎn)、P-Loop。STPO1蛋白的GO功能分析顯示,STPO1蛋白具有DNA錯(cuò)配修復(fù)的功能,能夠在ATP供能的情況下,識(shí)別并結(jié)合DNA錯(cuò)配位點(diǎn),然后對(duì)其進(jìn)行修復(fù)。產(chǎn)孢相關(guān)蛋白主要通過(guò)維持減數(shù)分裂的正常進(jìn)行來(lái)參與擔(dān)孢子的形成,但功能預(yù)測(cè)結(jié)果并未顯示STPO1具有這方面的功能。
3、通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-qPCR)分析了糙皮側(cè)耳stpo1的表達(dá)
5、模式。結(jié)果顯示,stpo1基因在子實(shí)體成熟期的表達(dá)量最高,在其他時(shí)期基本不表達(dá);且其在成熟子實(shí)體菌褶中的表達(dá)量遠(yuǎn)高于菌柄和菌肉中的表達(dá)量,在菌柄和菌肉中基本不表達(dá)。以上結(jié)果說(shuō)明:stpo1基因只在糙皮側(cè)耳成熟子實(shí)體的菌褶中特異表達(dá),由此表明stpo1基因可能與糙皮側(cè)耳的孢子形成有一定的關(guān)系。
4、采用pEASY-E2原核表達(dá)系統(tǒng)對(duì)stpo1進(jìn)行了原核誘導(dǎo)表達(dá),成功獲得了與分子量預(yù)測(cè)結(jié)果相符的融合蛋白STPO1(大小約為94kD
6、a),進(jìn)一步證明本文成功克隆獲得了stpo1基因的完整編碼區(qū),為后續(xù)研究糙皮側(cè)耳的DNA錯(cuò)配修復(fù)以及減數(shù)分裂的分子機(jī)制奠定了一定基礎(chǔ)。
5、在雙元表達(dá)載體pCAMBIA1300的基礎(chǔ)上將潮霉素抗性基因上游的CaMV35S啟動(dòng)子更換為糙皮側(cè)耳的gpd啟動(dòng)子,以提高潮霉素抗性基因在糙皮側(cè)耳中的表達(dá)量。將stpo1基因的CDS區(qū)連入另外一個(gè)gpd啟動(dòng)子的下游,成功構(gòu)建了stpo1基因過(guò)表達(dá)載體;同時(shí)將stpo1的發(fā)卡結(jié)構(gòu)連入gpd啟
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 白靈側(cè)耳結(jié)實(shí)相關(guān)基因的克隆及表達(dá)分析.pdf
- 3800.糙皮側(cè)耳漆酶轉(zhuǎn)錄因子基因ltf4的克隆及功能分析
- 糙皮側(cè)耳單孢雜交優(yōu)良菌株選育初步研究.pdf
- 盾殼霉產(chǎn)孢相關(guān)基因的克隆及液體產(chǎn)孢條件的優(yōu)化.pdf
- 糙皮側(cè)耳的AFLP分析及多態(tài)性片段的鑒定.pdf
- 糙皮側(cè)耳2-Cys Prx基因功能的研究.pdf
- 黨參的糙皮側(cè)耳發(fā)酵及發(fā)酵液的應(yīng)用.pdf
- mRNA差異顯示技術(shù)研究糙皮側(cè)耳菌絲體及子實(shí)體差異表達(dá)基因.pdf
- 雙孢蘑菇褐變相關(guān)PPO基因的克隆及表達(dá)分析.pdf
- 糙皮側(cè)耳水溶性多糖的分離純化及結(jié)構(gòu)研究.pdf
- 糙皮側(cè)耳秸稈分解優(yōu)化菌株選育研究.pdf
- 綠僵菌微循環(huán)產(chǎn)孢及相關(guān)基因分析.pdf
- 黃芪的糙皮側(cè)耳發(fā)酵及其發(fā)酵液的藥效研究.pdf
- 糙皮側(cè)耳優(yōu)良雜交子篩選與側(cè)耳屬野生菌株馴化栽培研究.pdf
- 盾殼霉產(chǎn)孢和生長(zhǎng)相關(guān)基因的克隆及功能驗(yàn)證.pdf
- 光皮樺成花相關(guān)SPL基因的克隆、表達(dá)及功能分析.pdf
- 煙粉虱被球孢白僵菌侵染后免疫應(yīng)答相關(guān)基因的克隆及表達(dá)分析.pdf
- 盾殼霉產(chǎn)孢相關(guān)基因的克隆及腺苷脫氨酶(CMADA)基因的初步研究.pdf
- 糙皮側(cè)耳對(duì)重金屬的去除及其耐受機(jī)制研究.pdf
- 稻曲病菌侵染特性及產(chǎn)孢相關(guān)基因UvPRO1的功能分析.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論