水稻OsLZTF基因的克隆與功能分析.pdf

1、干旱脅迫是影響植物生長發(fā)育的一個重要因素，在植物的整個生育期，都可能受到干旱脅迫的侵害。干旱脅迫會降低種子發(fā)芽率，抑制根系生長，降低株高，減少葉片，抑制植物的光合作用，延遲抽穗和開花，降低產(chǎn)量和種子品質(zhì)。但在不同生育階段，植物對干旱脅迫的敏感性不同。植物作為一個整體，在干旱脅迫發(fā)生時，所有的組織、器官都發(fā)生了一系列的生理生化變化。
　　水稻是高溫喜濕作物，干旱脅迫不僅會降低產(chǎn)量，而且嚴重影響稻米的品質(zhì)。隨著全球范圍內(nèi)淡水資源的缺乏

2、加劇，如何提高水稻的抗旱性成為生物科學(xué)研究的一個重要方向。分子生物學(xué)的快速發(fā)展，使從分子水平研究植物的抗旱性取得了許多重要成果，為抗旱水稻的分子育種提供了理論依據(jù)。通過轉(zhuǎn)基因方法，改變水稻生育期內(nèi)干旱相關(guān)基因的表達量，可以在較短時間內(nèi)獲得抗旱性較高的植株，縮短育種時間。
　　OsLZTF(Gramene: LOC_Os02g43330)基因，位于水稻的第2號染色體長臂，長度為1423bp，含有兩個外顯子，一個內(nèi)含子。其中，cDNA

3、長1336bp，全編碼框長度為786bp，編碼一個長度為261個氨基酸殘基的蛋白質(zhì)，分子量約為29KD。通過熒光定量PCR反應(yīng)，發(fā)現(xiàn)該基因在水稻品種日本晴的根、莖、葉組織中都有不同程度的表達，表達量隨著干旱脅迫時間的延長而變化，因此推測該基因與水稻的抗旱性有關(guān)。利用生物信息學(xué)軟件，設(shè)計特異性引物將該基因從日本晴葉片cDNA中擴增出來，構(gòu)建超表達和抑制表達載體，然后利用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)體系，將該基因?qū)胍吧腿毡厩?，成功獲得陽性轉(zhuǎn)基因植株和

4、T0代種子。
　　主要研究結(jié)果:
　　1.從野生型日本晴的葉片cDNA中，成功克隆出OsLZTF基因，并對其進行了生物信息學(xué)分析。
　　2.運用熒光定量PCR反應(yīng)分析了OsLZTF基因在日本晴各組織中的表達水平，發(fā)現(xiàn)在未經(jīng)干旱處理時，該基因在根、莖、葉中均有不同程度的表達，在干旱處理下，該基因在各組織中的表達量隨著處理時間的變化而改變。
　　3.構(gòu)建了OsLZTF基因的超表達和抑制表達載體，以根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)方式，