IrrE基因轉(zhuǎn)化甘藍(lán)型油菜及其對(duì)NaC1脅迫耐受性應(yīng)答的研究.pdf

1、甘藍(lán)型油菜(Brassica napus L.)屬于十字花科蕓薹屬植物，是全世界較為重要的一種油料栽培作物，在整個(gè)生長發(fā)育期中對(duì)鹽脅迫都很敏感。為了增強(qiáng)油菜的鹽耐受性，我們以來源于耐輻射異常球菌的IrrE基因?yàn)橥庠椿?，下胚軸為外植體，采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化方法，對(duì)甘藍(lán)型油菜進(jìn)行轉(zhuǎn)化，獲得轉(zhuǎn)IrrE基因的油菜。結(jié)果表明：
　　 1、轉(zhuǎn)IrrE基因油菜能忍受350mmol/L NaCl高鹽脅迫，并能正常生長發(fā)育，當(dāng)然有些相關(guān)的農(nóng)

2、藝性狀發(fā)生了一定的變化，主要表現(xiàn)在株高、主花序長度、全株有效角果數(shù)差異極顯著，而野生型油菜在相同的脅迫下處理48h后就會(huì)死亡。
　　 2、轉(zhuǎn)基因油菜幼苗和野生型油菜幼苗在200mmol/L NaCl脅迫48之間，隨著脅迫時(shí)間的延長，轉(zhuǎn)IrrE基因和野生型油菜的CAT、SOD、POD三種抗氧化酶活性均增加，其中野生型油菜的三種抗氧化酶在24h后達(dá)到峰值，隨后逐漸下降，而轉(zhuǎn)IrrE基因油菜的三種抗氧化酶活性卻持續(xù)增加，并在相同的脅迫

3、時(shí)間內(nèi)均高于野生型油菜的酶活性。說明了IrrE基因通過提高轉(zhuǎn)IrrE基因油菜的抗氧化酶活性來增加植物的抗鹽性。
　　 3、與野生型油菜相比，轉(zhuǎn)基因油菜MDA的含量低，在200mmol/L濃度的NaCl脅迫處理48小時(shí)后野生型油菜MDA含量是0.75umol/L，而轉(zhuǎn)基因MDA含量是0.6umol/L。說明IrrE基因表達(dá)產(chǎn)物調(diào)控了高鹽帶來的膜脂過氧化過程，從而穩(wěn)定了細(xì)胞膜的基本結(jié)構(gòu)，減少了高鹽對(duì)植物的傷害。
　　 4、2

4、00mmol/L濃度的NaCl脅迫處理48小時(shí)，轉(zhuǎn)基因油菜中脯氨酸含量提高了9倍，而野生型植株基本沒有變化。此外，與野生型油菜相比轉(zhuǎn)基因油菜種可溶性蛋白濃度較高，在200mmol/L濃度的NaCl脅迫處理48小時(shí)后轉(zhuǎn)基因油菜可溶性蛋白濃度是250ug/ul，而非轉(zhuǎn)基因可溶性蛋白含量是210ug/ul。說明IrrE基因表達(dá)產(chǎn)物影響了氨基酸的合成與分解，對(duì)高鹽所帶來的對(duì)氨基酸的破壞起到有效的保護(hù)作用。
　　 5、通過酵母雙雜交技術(shù)，