交換形成相關基因的RNAi載體構建及轉化甘藍型油菜研究.pdf

1、減數分裂中，同源染色體相互識別、配對后在非姊妹染色單體間發(fā)生片段交換，導致同源重組的發(fā)生。同源重組是生物多樣性產生的重要來源之一。近年來，隨著研究者對模式植物擬南芥、水稻減數分裂機制的深入研究，越來越多的參與交換形成的基因被發(fā)掘，使得人工調控交換的發(fā)生及其頻率成為可能，在作物遺傳育種中具有重要的潛在應用價值。甘藍型油菜（Brassica napus，AACC）為白菜(B.rapa，AA)與甘藍(B.oleracea，CC)雜交形成的異源

2、四倍體，是我國重要的油料作物之一。由于缺少天然及人工突變體，對其減數分裂調控機制的研究鮮有報道。本研究的主要目的是利用RNAi技術降低甘藍型油菜中相關基因（均為擬南芥減數分裂中參與交換形成的同源基因）的表達，分析甘藍型油菜減數分裂中交換形成的分子機制，并為通過同源/部分同源重組引入野生近緣種優(yōu)異基因建立材料基礎。主要結果如下:
　　1)利用RT-PCR擴增，從甘藍型油菜Westar中獲得FIGL1、MHF1、XRCC2、ASY1和

3、MUS81目標干涉區(qū)段。以質粒pFGC-5941為骨架，構建了上述五個基因的RNAi載體，并通過酶切與測序驗證。
　　2)利用農桿菌介導的遺傳轉化技術，以下胚軸為外植體，將上述載體分別轉入甘藍型油菜Westar、J9709和JW76中，抗性篩選后共得到再生植株78株。
　　3)對其中66株進行PCR凇測，共鑒定到陽性植株48株，平均轉化效率為72.73％。其中帶有FIGL1載體陽性植株25株，MHF1陽性株8株，XRCC2陽