堿性纖維素酶產(chǎn)生菌的分離、選育、發(fā)酵產(chǎn)酶條件及酶學(xué)性質(zhì)研究.pdf

1、本文利用CMC透明圈分離法從土樣中分離獲得1株產(chǎn)堿性纖維素酶的假諾卡氏菌屬(Prauseria)放線菌IS-H，采用液體振蕩培養(yǎng)技術(shù)，以6％接種量接種子液于pH8的發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)基中，28℃振蕩培養(yǎng)5d，CMC酶活力達(dá)到7.64U/mL。通過(guò)對(duì)CMC液化力、糖化力及濾紙?zhí)腔y(cè)定分析，此菌株產(chǎn)生的酶大部分屬內(nèi)切β-1，4-葡聚糖苷酶(CMC酶)，對(duì)該酶特性進(jìn)行初步研究，酶的最適反應(yīng)溫度為40℃，當(dāng)pH維持于6～11，溫度維持于10～60℃

2、，酶活力可保持在60％以上，能較好地滿足日常洗滌的環(huán)境要求。利用紫外線(UV)對(duì)菌株IS-H進(jìn)行誘變，獲得1株CMC酶活力達(dá)到17.59U/mL的突變株MS-H16。當(dāng)以6％接種量接種子液于pH8，分別以20g/L蔗糖、10g/L硝酸銨為碳、氮源，添加0.5g/LMgSO4的最適產(chǎn)酶培養(yǎng)基中，26℃振蕩培養(yǎng)5d，其酶活力達(dá)到18.29U/mL，比初始酶活力提高了6.29倍。 同時(shí)以一株產(chǎn)CMC酶的軟化芽孢桿菌(B.maceran

3、s)IS-B為研究對(duì)象，在搖瓶振蕩培養(yǎng)條件下，以5％接種量接24h種子液于pH9，分別以4.0％麥芽糖和1.0％蛋白胨為碳、氮源，添加0.5％NaCl和0.1％KH2PO4，裝液量為75mL/250mL的最適產(chǎn)酶培養(yǎng)基中，37℃振蕩培養(yǎng)48h，酶活力達(dá)到85.69U/mL；在5L發(fā)酵罐中，以5％接種量接24h種子液于pH10的最適產(chǎn)酶培養(yǎng)基中，37℃發(fā)酵48h，當(dāng)攪拌速度為400r/min，通氣量為1.0L/min，溶氧值可維持在65％