鉛鎘對(duì)小鼠卵泡顆粒細(xì)胞凋亡及凋亡基因表達(dá)的影響.pdf

1、鎘(Cd)、鉛(Pb)是常見(jiàn)的環(huán)境污染物。它們除了具有神經(jīng)、造血、消化、腎臟、肝臟及心血管等系統(tǒng)毒性外,還具有生殖毒性。本實(shí)驗(yàn)主要通過(guò)研究這兩種重金屬對(duì)顆粒細(xì)胞凋亡的影響來(lái)探討其對(duì)小鼠生殖機(jī)能的毒性作用;而細(xì)胞凋亡的發(fā)生又與凋亡相關(guān)基因的基因組群有關(guān),這些基因根據(jù)功能可分為凋亡基因和凋亡抑制基因,前者誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,主要有Bax、Bad、Bim、Bik、p53、Bcl-Xs等;后者抑制細(xì)胞凋亡,主要有Bcl-2、Bcl-X、Mcl-1等,

2、其中Bcl-2和Bax是細(xì)胞凋亡過(guò)程中起關(guān)鍵性作用的一對(duì)功能基因。本實(shí)驗(yàn)主要討論凋亡發(fā)生過(guò)程中這兩個(gè)基因的相對(duì)表達(dá)量,從分子水平反應(yīng)重金屬對(duì)凋亡的影響。
　　 本研究以25日齡小鼠為研究對(duì)象,分別用0.5 mg/kg、1 mg/kg、2mg/kg、4mg/kg醋酸鉛溶液連續(xù)攻毒5d,氯化鎘溶液攻毒48h,對(duì)照組小鼠注射超純水。醋酸鉛溶液攻毒5d、氯化鎘溶液攻毒48h后,各組小鼠注射PMSG,48h后脫頸椎法處死小鼠,取出卵巢,用

3、5號(hào)針頭刺破卵泡,收集顆粒細(xì)胞,用流式細(xì)胞儀檢測(cè)顆粒細(xì)胞凋亡率。結(jié)果顯示:連續(xù)攻毒醋酸鉛一周的小鼠,2mg/kg組顆粒細(xì)胞凋亡率最高。對(duì)照組、0.5mg/kg組與其有極顯著差異(P＜0.01),1mg/kg組、4mg/kg組與其有顯著差異(P＜0.05),其余各組均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。而一次性攻毒氯化鎘48h的小鼠,各組之間均無(wú)差異顯著性。
　　 根據(jù)NCBI上已發(fā)表的小鼠Bcl-2和Bax mRNA序列,在跨外顯子序

4、列處設(shè)計(jì)引物。采集小鼠卵巢組織,利用Trizol法提取總RNA,然后用RT-PCR法進(jìn)行cDNA擴(kuò)增,通過(guò)半定量RT-PCR檢測(cè)Bcl-2和Bax在小鼠卵巢中的表達(dá)情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn),在2mg/kg濃度范圍內(nèi),隨著攻毒劑量的增加,Bcl-2表達(dá)量依次減弱,且極顯著低于對(duì)照組(P＜0.01),Bcl-2/Bax比值在該濃度范圍內(nèi)也逐漸下降,但當(dāng)醋酸鉛濃度升高,為4mg/kg時(shí),Bcl-2及Bcl-2/Bax值則有所升高,但均低于對(duì)照組;0.5