版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、不耐熱腸毒素(heat-labileenterotoxin,LT)是由產(chǎn)腸毒素大腸桿菌(EnterotoxigenicEscherichiacoli,ETEC)產(chǎn)生的六聚體型蛋白,是引起人和動物腹瀉的主要致病因子。因其具有很強(qiáng)的免疫原性以及能夠輔助其他抗原通過粘膜免疫途徑使機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體,而被認(rèn)為是良好的粘膜免疫佐劑,但因其具有較強(qiáng)的毒性而限制了LT在臨床上的使用。因此,制備無毒而又保留佐劑活性的LT,將其開發(fā)為優(yōu)秀的粘膜免疫佐劑,
2、有著重要的醫(yī)學(xué)價值和經(jīng)濟(jì)價值。
為獲得無毒且保留佐劑活性的LT蛋白,我們以產(chǎn)腸毒素大腸桿菌S462212株為材料,根據(jù)已發(fā)表的LT基因序列,設(shè)計(jì)了特異性引物,用重疊延伸PCR方法獲對LT的A亞單位基因進(jìn)行定點(diǎn)突變,成功將A亞單位第63位編碼Ser的密碼子(TCT)突變?yōu)榫幋aLys的密碼子(AAA),成功獲得突變基因LTS63K,并將其克隆入原核表達(dá)載體pET-30a(+)中,在E.coliBL21中成功表達(dá)出約50KD的目
3、的蛋白,與預(yù)期結(jié)果一致,表明重組菌pET-LTS63K構(gòu)建成功,為研究其佐劑效應(yīng)奠定了基礎(chǔ)。
相關(guān)研究表明,原核表達(dá)的CTLA-4胞外區(qū)具有靶向提呈抗原的功能,我們將LT突變蛋白與CTLA-4胞外區(qū)在大腸桿菌中融合表達(dá)以研究融合蛋白的免疫佐劑效應(yīng)。將研究一中構(gòu)建的LT突變基因片段,克隆入重組載體pET-CTLA-4IgV,獲得重組表達(dá)質(zhì)粒pET-CTLA-LTS63K,將其轉(zhuǎn)化BL21(DE3)大腸桿菌。經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后,
4、SDS-PAGE顯示出預(yù)期約60KD的蛋白條帶。Western-blotting結(jié)果顯示,突變蛋白LTS63K和融合蛋白CTLA-LTS63K均能被LT抗血清識別,證明表達(dá)的重組蛋白具有較好的反應(yīng)原性。
為了研究突變體蛋白LTS63K與融合蛋白CTLA-LTS63K對滅活疫苗免疫效果的影響,用獲得的蛋白溶液與禽流感滅活疫苗同時肌肉注射雛雞。將160只7日齡健康非免疫雛雞平均分為6組,第1、2組用不同劑量的LTS63K蛋白與
5、疫苗同時免疫;第3、4組用不同劑量的CTLA-LTS63K融合蛋白與疫苗同時免疫;第5組只用疫苗免疫,不加蛋白;第6組為陰性對照組,不做任何處理。于首免后每隔7天采取血清樣品和粘膜樣品,分別測定血清中的IgG和粘膜分泌性IgA的抗體水平。結(jié)果顯示,兩種蛋白對滅活疫苗的佐劑效果不明顯,與第5組檢測結(jié)果無顯著性差異。
為了研究突變體蛋白LTS63K與融合蛋白CTLA-LTS63K對粘膜免疫的影響,我們用獲得的蛋白溶液作為稀釋液
6、稀釋IBDV弱毒疫苗,口服免疫雛雞,3周齡加強(qiáng)免疫一次;將240只7日齡健康非免疫雛雞平均分為8組,第1、2、3組的稀釋液中含有不同劑量的LTS63K蛋白;第4、5、6組的稀釋液中含有不同劑量的CTLA-LTS63K融合蛋白;第7組用生理鹽水作為稀釋液,不加蛋白;第8組為陰性對照組,不做任何處理。于首免后每隔7天采取血清樣品和粘膜樣品,分別測定血清中的IgG和粘膜分泌性IgA的抗體水平。結(jié)果顯示,突變蛋白及融合蛋白通過粘膜免疫途徑均能增
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 大腸桿菌不耐熱腸毒素的克隆、改造及表達(dá).pdf
- 大腸桿菌不耐熱腸毒素LT在煙草中的表達(dá).pdf
- 重組大腸桿菌不耐熱腸毒素Ⅱ型蛋白部分生物活性研究.pdf
- 大腸桿菌不耐熱腸毒素B亞單位構(gòu)建表達(dá)與毒性實(shí)驗(yàn).pdf
- 大腸桿菌不耐熱腸毒素突變體的構(gòu)建及其粘膜免疫劑活性的研究與B亞單位單克隆抗體的制備.pdf
- 大腸桿菌不耐熱腸毒素B亞單位的原核表達(dá)及其初步應(yīng)用.pdf
- 重組大腸桿菌不耐熱腸毒素及其無毒衍生物的構(gòu)建和表達(dá).pdf
- 大腸桿菌不耐熱腸毒素2型突變體的構(gòu)建及其抗原性研究.pdf
- 大腸桿菌不耐熱腸毒素對新城疫疫苗的免疫增強(qiáng)作用研究.pdf
- 重組大腸桿菌不耐熱腸毒素及其突變體以及其B亞單位的構(gòu)建表達(dá)與性質(zhì)研究.pdf
- 大腸桿菌不耐熱腸毒素B亞單位(LTB)的突變型佐劑活性及其作用機(jī)制研究.pdf
- 大腸桿菌不耐熱腸毒素對小鼠胚胎穩(wěn)定性的影響及分子機(jī)制的研究.pdf
- 大腸桿菌不耐熱腸毒素誘導(dǎo)小鼠細(xì)胞因子變化規(guī)律研究.pdf
- 重組大腸桿菌不耐熱腸毒素B亞單位對鴨的安全性研究.pdf
- 大腸桿菌不耐熱腸毒素亞單位的克隆、表達(dá)及A亞單位單克隆抗體的制備.pdf
- 大腸桿菌不耐熱腸毒素B亞單位(LTB)對羅非魚鏈球菌口服疫苗免疫增強(qiáng)效果的初步研究.pdf
- 抗大腸桿菌耐熱腸毒素中藥方劑的篩選及其機(jī)理研究.pdf
- 大腸不耐熱腸毒素B亞單位作為佐劑的分子機(jī)理研究.pdf
- 共表達(dá)豬細(xì)小病毒VP2與大腸桿菌不耐熱腸毒素B亞單位重組乳酸桿菌構(gòu)建及其免疫學(xué)初步評價.pdf
- 大腸桿菌不耐熱腸毒素B亞單位單克隆抗體的制備及其B細(xì)胞線性表位分析.pdf
評論
0/150
提交評論