凡納濱對(duì)蝦C-型凝集素在抗病家系中表達(dá)譜及其SNP位點(diǎn)的研究.pdf

1、凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeus vannamei)是當(dāng)今世界養(yǎng)殖蝦類產(chǎn)量最高的三大品種之一，是我國水產(chǎn)養(yǎng)殖的支柱產(chǎn)業(yè)——對(duì)蝦海水養(yǎng)殖業(yè)中的重要養(yǎng)殖品種。但隨著養(yǎng)殖業(yè)大力發(fā)展，環(huán)境污染加劇、水質(zhì)惡化、病害流行，對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)面臨著巨大威脅。尤其是白斑綜合癥病毒(White spot syndrome virus，WSSV)，由于其傳播迅速，致死率高，危害性大，給對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失，所以成為對(duì)全球?qū)ξr養(yǎng)殖業(yè)造成危害最大病原之一。為了

2、減少包括白斑病在內(nèi)各種病害對(duì)對(duì)蝦養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)造成的損失，研究對(duì)蝦抗病基因，提高對(duì)蝦自身免疫力，增強(qiáng)其機(jī)體防御機(jī)能是綜合防治的根本措施之一。
　　 目前，對(duì)蝦的天然免疫系統(tǒng)中免疫分子凝集素了解不多，特別是轉(zhuǎn)錄水平上基因變化與對(duì)蝦抗病能力關(guān)系方面研究更是少有報(bào)道。本研究應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，分析了凡納濱對(duì)蝦肝胰腺中兩個(gè)C-型凝集素基因Lvlectin4E和Lvlectin5D在不同抗病能力家系對(duì)蝦中的基因表達(dá)量。結(jié)果顯示，兩基因在

3、25個(gè)家系對(duì)蝦肝胰腺中基因表達(dá)量均存在顯著性差異，665系列家系整體表達(dá)水平較高。其中665(1)-7-8家系對(duì)蝦的Lvlecin4E天然表達(dá)量最高，603-4-11-2-3家系對(duì)蝦的Lvlectin4E基因表達(dá)量最低，差異極顯著(P＜0.001)；Lvlectin5D在665(1)-7-5家系對(duì)蝦中表達(dá)量最高，在603-4-11-2-3家系對(duì)蝦中表達(dá)最低，差異極顯著(P＜0.001)。進(jìn)行兩基因表達(dá)量相關(guān)性分析后建立Lvlectin4

4、E(y)與Lvlectin5D(x)的回歸曲線：y=0.275+0.155x(R=0.513，P＜0.05)。進(jìn)行基因天然表達(dá)量與抗病評(píng)價(jià)和14天存活率相關(guān)分析后，發(fā)現(xiàn)Lvlectin5D與抗病評(píng)價(jià)相關(guān)(P＜0.05)，與14天存活率顯著相關(guān)(P＜0.01)，并通過回歸分析建立Lvlectin5D(y)與抗病評(píng)價(jià)(x)的回歸方程：y=0.508+0.608x(R=0.454)，以及Lvlectin5D與14天存活率(x)的回歸方程：y=

5、0.109+0.229x(R=0.568)。說明Lvlectin5D基因表達(dá)可以作為對(duì)蝦抗病能力強(qiáng)弱的肝胰腺指標(biāo)，為對(duì)蝦抗病家系育種提供理論依據(jù)。但是通過分析并未看出Lvlectin4E基因表達(dá)量與對(duì)蝦抗病能力有相關(guān)性，因此推測(cè)兩基因在對(duì)蝦機(jī)體中抗病功能和作用方式有所不同。
　　 通過對(duì)抗病能力相近的603-4-11-2-1家系和603-4-11-2-3家系進(jìn)行活體對(duì)蝦攻毒實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)Lvlectin4E和Lvlectin5D的基

6、因表達(dá)變化。結(jié)果顯示，在對(duì)蝦感染W(wǎng)SSV后肝胰腺中Lvlectin4E和Lvlectin5D基因表達(dá)量呈現(xiàn)波動(dòng)式表達(dá)規(guī)律。其中兩凝集素基因0h表達(dá)量高的603-4-11-2-1家系對(duì)蝦在感染W(wǎng)SSV后，兩凝集素基因表達(dá)量早期先下調(diào)后上升，而0h基因表達(dá)量低的602-4-11-2-3家系對(duì)蝦中則是凝集素基因表達(dá)量早期直接上調(diào)，推測(cè)對(duì)蝦體內(nèi)C-型凝集素基因天然表達(dá)量能影響對(duì)蝦機(jī)體對(duì)病毒的作用方式。進(jìn)行2個(gè)家系各時(shí)間點(diǎn)凝集素基因表達(dá)差異研究，

7、發(fā)現(xiàn)感染W(wǎng)SSV后Lvlectin4E和Lvlectin5D在兩個(gè)家系對(duì)蝦中的基因表達(dá)水平差異減小，說明感染W(wǎng)SSV后不影響Lvlectin5D基因表達(dá)作為抗病能力強(qiáng)弱的肝胰腺指標(biāo)的性質(zhì)。對(duì)比注射PBS的對(duì)照組中C-型凝集素基因表達(dá)情況，再次證實(shí)C-型凝集素對(duì)蝦感染W(wǎng)SSV后下調(diào)作用方式。
　　 通過對(duì)15個(gè)抗病能力不同的凡納濱家系Lvlectin4E部分編碼區(qū)進(jìn)行SNP搜尋，發(fā)現(xiàn)在第81個(gè)bp處存在一個(gè)SNP位點(diǎn)(GeneBa