龍眼LFY同源基因表達及啟動子克隆.pdf

1、龍眼(Dimocarpus longan L．)是我國具有重要經(jīng)濟價值的名優(yōu)特色果樹，也是我國在國際市場上極具競爭力的特色水果，但龍眼大小年結(jié)果、鮮果不能周年供應(yīng)市場等問題尚未得到有效解決，這些都與龍眼花芽分化有關(guān)。
　　 LFY基因在有花和無花植物中都存在，是決定花分生組織形成的必需基因，并在花形成中發(fā)揮著接連許多花誘導(dǎo)途徑的輸出信號和激活花器官決定基因的關(guān)鍵作用。因此，對LFY基因的研究成為目前關(guān)于成花基因研究中的一個熱點。

2、官磊(2007)采用染色體步移技術(shù)，克隆龍眼LFY同源基因編碼區(qū)全長序列，并采用半定量RT-PCR技術(shù)對LLFY基因的功能進行了初步研究。本試驗在此基礎(chǔ)上細化了龍眼花芽分化采樣過程，運用半定量RT-PCR技術(shù)進一步研究LLFY基因的表達。同時，進行LLFY在四季蜜龍眼中表達的研究。此外，本試驗應(yīng)用染色體步移技術(shù)，克隆了龍眼LLFY基因的啟動子序列片段，并對啟動子序列進行分析。主要研究結(jié)果如下：
　　 1、龍眼LLFY表達的研究<

3、br>　　 為了研究LLFY基因在龍眼花芽分化不同時期的表達情況，本實驗分別選取“紅核子”葉芽以及2月份到4月份不同時期的花序頂芽，運用半定量RT-PCR技術(shù)檢測LLFY基因的表達情況。實驗結(jié)果表明，LLFY的表達不僅與龍眼花序的分化有關(guān)，也與花芽的分化有關(guān)。同時，LLFY在“四季蜜”龍眼中的表達結(jié)果顯示，LLFY表達量的增加可能與四季蜜龍眼早花以及四季開花的特性有關(guān)。
　　 2、龍眼LLFY啟動子序列的克隆和分析
　　

4、 采用染色體步移技術(shù)，根據(jù)龍眼LLFY編碼區(qū)基因組DNA序列設(shè)計特異性引物，進行LA-PCR擴增，獲得龍眼LLFY基因啟動子約800bp序列。運用Plant CARE、FootPriter等軟件進行序列分析，結(jié)果表明，在此序列中除含有TATA-box和CAAT-box兩個主要元件外，還含有多個潛在的順式作用元件，如MYB結(jié)合位點、ABA響應(yīng)元件(ABRE)和一些光響應(yīng)元件如GA-box、GAG-motif、 I-box等，說明龍眼LL