水稻TFL2基因的克隆與轉(zhuǎn)化.pdf

1、花發(fā)育的分子遺傳學研究是90年代以來植物發(fā)育分子生物學的一個研究熱點。近年來，隨著對雙子葉植物花發(fā)育機制研究的深入，雙子葉植物花的誘導、形成以及花器官分化的分子遺傳學機制已創(chuàng)立。但是，對單子葉植物花發(fā)育過程的分子機制研究還不深入，因此對單子葉植物水稻花器官發(fā)育的研究，對植物發(fā)育生物學與分子生物學的發(fā)展有著重要的意義。
　　 TFL2是一成花基因。在雙子葉模式植物擬南芥中，TFL2主要表達在維管束及植株分生組織，延遲開花時間，突變

2、體tfl2主要表現(xiàn)為早花和頂端花。TFL2基因表達產(chǎn)物是HP1（heterochromatin protein1）的同系物-LHP1。若能清楚了解TFL2基因在其他植物的表達情況，將具有重要的現(xiàn)實意義。
　　 本研究以水稻作材料，利用PCR擴增技術(shù)從水稻栽培品種農(nóng)墾58N中克隆到TFL2基因目的片段，構(gòu)建TFL2基因超量表達及RNA干擾載體，并利用基因轉(zhuǎn)導技術(shù)，獲得轉(zhuǎn)基因植株，以期通過對轉(zhuǎn)基因水稻的細胞學和表型分析來研究TFL2

3、基因的表達調(diào)控和功能。
　　 首先，我們將擴增到的35S Promoter、Noster、TFL2 RNA interference（TFL2RNAi）目的片段、TFL2超量表達（TFL2 overexpression）目的片段克隆到相應的中間載體176＃和pUC18中間載體中，命名為176＃-TFL2 RNAi以及pUC18-TFL2overexpression，以便于DNA測序和雙酶切。進而將雙酶切的目的片段分別轉(zhuǎn)入植物表達

4、載體pCAMBIA1301中，構(gòu)建成相應的植物表達載體pCAMBIA1301-TFL2 RNAi和pCAMBIA1301-TFL2 overexpression。采用預培養(yǎng)2天的粳稻品種農(nóng)墾58N的成熟胚愈傷組織作為轉(zhuǎn)化受體材料，將構(gòu)建好的重組質(zhì)粒與含有潮霉素基因的5＃質(zhì)?；旌?，基因槍轟擊后，26℃暗培養(yǎng)48小時，轉(zhuǎn)入篩選培養(yǎng)基進行篩選。經(jīng)過3代（2周/代）時間篩選，獲得抗性愈傷組織，將生長旺盛的愈傷轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基培養(yǎng)，數(shù)周后獲得再生轉(zhuǎn)