高通量測序檢測單側輸尿管梗阻大鼠腎組織中的microRNA表達.pdf

1、論文題目：直適量型莊撿型望倒撿屋筻捶墮去鼠豎組堡生的墮i￡!Q基叢△垂鯊答辯委員會主席：迕噩噩答辯委員會成員：捏籃國型塑論文答辯日期：2Q!!生旦!旦——!!!!!!!!!!!高通量測序檢測單側輸尿管梗阻大鼠腎組織中的microRNA表達碩士研究生：謝媚排i導師：蘇震豐任醫(yī)師中文摘要：目的：觀察microRNA(miRNA)在大鼠單側輸尿管梗阻(unilateralureteralobstruction，UUO)模型腎組織中的表達變化，

2、篩選與腎問質纖維化(renalinterstitialfibrosis，RIF)相關的特異性miRNA。方法：28只雄性SpragueDawlay(SD)大鼠，隨機分為UUO組和假手術對照組，于術后i天、3天處死。UUO組和假手術組腎組織行HE染色和Masson染色觀察腎小管間質病變程度。實時熒光定量PCR檢測UUO組和假手術組腎組織細胞外基質膠原I(CollagenIColI)和纖連蛋白(Fibronectin，FN)的mRNA水平。

3、提取術后1天和術后3天的UUO組大鼠手術側和非手術側腎臟組織總RNA，進行高通量測序，即Solexa洲序。對于洲序所得的數據進行小RNA信息分析，篩選有顯著差異表達的miRNA。將兩次測序中有顯著差異表達的5l條miRNA“fold—change【1_3)使用Targetsan5l數據庫預測靶mRNA對靶mRNA進行OeneOntology和pathway分析獲得有顯著性意義的靶mRNA。利用miRNA與靶mRNA之間的靶向澗控關系，構

4、建microRNAGene網絡圖，同時利用圖論的方法對網絡中miRNA和gene在網絡中的調控地位進行評價，評價的標準以度來衡量。對于度雖高的11個miP(=qA使用實時熒光定量PCR來檢測UUO組相對于假手術組的表達量以及UUO組手術側相對于非手術側裘達量。結果：l刖m睛理結果：假手術組腎臟未見明顯病變。術后l天UUO組梗阻側腎組織小管管腔擴張和間質水腫不明顯，小球結構正常。術后3天塒O組梗阻側腎組織可見灶狀小管上皮扁平化伴管腔擴張，