超大劑量氯沙坦對于大鼠單側(cè)輸尿管梗阻模型的腎保護(hù)作用.pdf

1、[背景與目的] 腎間質(zhì)纖維化是慢性進(jìn)展性腎病的重要組織學(xué)表現(xiàn)，是導(dǎo)致終末期腎功能衰竭的最終共同通道。近年來，隨著對腎間質(zhì)纖維化研究的不斷深入，認(rèn)為腎間質(zhì)纖維化是一個獨(dú)立于病因之外的進(jìn)展過程，涉及到腎小管上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞的損傷、炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子的產(chǎn)生、炎癥細(xì)胞的浸潤、成纖維細(xì)胞的增殖、細(xì)胞外基質(zhì)的增多等一系列相互關(guān)聯(lián)的過程。眾多促纖維化因子通過激活炎癥反應(yīng)和改變細(xì)胞表型造成損傷，主要包括：(1)小管細(xì)胞外基質(zhì)蛋白的表達(dá)增加；(

2、2)單核巨噬細(xì)胞的激活；(3)小管上皮細(xì)胞向間充質(zhì)細(xì)胞的轉(zhuǎn)分化。其中最為關(guān)鍵的是TGF-β及其下游生長因子CTGF。氯沙坦是一種血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)受體拮抗劑(ARB)，對AT1受體具有高度選擇性，在受體水平特異性地拮抗循環(huán)或局部組織的AngⅡ。氯沙坦能降低體循環(huán)和腎小球毛細(xì)血管內(nèi)壓力、改善高血壓的血流動力學(xué)，減少血流剪切力(SS)引起的TGF-β表達(dá)增強(qiáng)，減少AngⅡ介導(dǎo)的TGF-β生成增加，減少腎組織中巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞的浸潤，

3、減少ECM的沉積等，延緩腎間質(zhì)纖維化，改善炎癥狀態(tài)。ARB通過降低腎小球毛細(xì)血管跨膜壓及直接減小毛細(xì)血管內(nèi)皮的窗孔降低濾過膜的通透性，從而減輕尿蛋白致腎間質(zhì)纖維化的作用也已非常明確。在以往的臨床研究和動物實(shí)驗(yàn)中已觀察到ARB直接對炎癥細(xì)胞和細(xì)胞因子的影響，這是該類藥物具有抗炎和抗纖維化的重要作用途徑。由于ARB的上述作用，包括氯沙坦在內(nèi)的許多ARB所做的動物實(shí)驗(yàn)和臨床試驗(yàn)均表明了較好的降壓降蛋白尿效果，部分延緩腎臟疾病的進(jìn)展，顯示腎保護(hù)

4、作用。而且其中一些實(shí)驗(yàn)顯示ARB的作用和劑量有關(guān)，探討腎保護(hù)的合適劑量及常規(guī)劑量和大劑量ARB的作用差異的機(jī)制成為當(dāng)前腎臟病學(xué)研究的熱點(diǎn)。為此，本實(shí)驗(yàn)以單側(cè)輸尿管梗阻(UUO)大鼠模型為研究對象，初步探討超大劑量氯沙坦能否優(yōu)于常規(guī)劑量，起到更多的腎臟保護(hù)作用。 [方法]選擇清潔級健康雄性Sprague-Dawl ey大鼠63只，體重180～200g，隨機(jī)分為4組：假手術(shù)組9只、UUO組18只、常規(guī)劑量氯沙坦組(50mg/kg/d

5、)(L50)18只、超大劑量氯沙坦組(500mg/kg/d)(L500)18只。麻醉后打開腹腔，雙結(jié)扎左側(cè)輸尿管；假手術(shù)組大鼠只打開腹腔不結(jié)扎輸尿管。各藥物治療組均于術(shù)后第三天開始用相應(yīng)藥物等量灌胃。假手術(shù)組和UUO組以等量生理鹽水灌胃。術(shù)后第7、14和21天測鼠尾動脈血壓，處死前一天單只置于代謝籠內(nèi)收集24h尿液。假手術(shù)組殺3只大鼠，其余組各殺6只。取左側(cè)部分腎組織于4％多聚甲醛固定，石蠟包埋；其余腎組織液氮冷凍，-80℃保存，待行R

6、T-PCR。24小時尿蛋白(UalbV)采用全自動生化儀測定。鼠尾袖帶血壓(TCP)采用RBP-1B測壓系統(tǒng)，測量大鼠在安靜、清醒狀態(tài)下的尾動脈壓，測定3次，取其平均值。石蠟切片行HE、Masson和PAS染色，動態(tài)觀察腎臟病理學(xué)變化，評定各組大鼠腎小管損害百分比、腎間質(zhì)纖維化程度。免疫熒光染色法測定腎間質(zhì)中巨噬細(xì)胞數(shù)的變化，應(yīng)用圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行定量分析結(jié)果。逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測腎臟轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)-β1 mRN

7、A的變化。應(yīng)用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)軟件對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。 [結(jié)論] 1．UUO大鼠腎間質(zhì)炎性細(xì)胞浸潤，腎小管擴(kuò)張、萎縮、壞死，腎間質(zhì)相對面積增寬，腎間質(zhì)纖維化；血壓增高，尿蛋白增多，TGF-β1mRNA表達(dá)顯著增強(qiáng)，單核巨噬細(xì)胞數(shù)增多。 2．氯沙坦能有效降低UUO大鼠血壓、減輕蛋白尿，隨著梗阻時間的延長，超大劑量治療組較常規(guī)劑量能更顯著降低蛋白尿。 3．兩氯沙坦治療組通過抑制大鼠單側(cè)輸尿管梗阻后