體細(xì)胞克隆法制備紅色熒光轉(zhuǎn)基因豬胚胎研究.pdf

1、本試驗(yàn)用紅色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因豬胎兒成纖維細(xì)胞做為供核細(xì)胞，體外成熟豬卵母細(xì)胞作為受體細(xì)胞，構(gòu)建了轉(zhuǎn)紅色熒光蛋白基因的重構(gòu)胚胎，并進(jìn)行了胚胎移植試驗(yàn)。探索了豬卵母細(xì)胞體外成熟、去核及融合，以及重構(gòu)胚體外發(fā)育的優(yōu)化條件。主要研究結(jié)果如下:
　　 1、TCM-199基礎(chǔ)液中添加不同物質(zhì)對(duì)卵母細(xì)胞體外成熟的影響。與無添加對(duì)照組卵母細(xì)胞成熟率76.64％比較，0.1％PVA、10％FBS和10％PFF的卵裂率分別是80.00％、78.21％

2、、87.04％;0.1％PVA和10％FBS沒有顯著差異(P＞0.05)，10％PFF顯著高于其它組(P＜0.05)。這些結(jié)果表明，用添加10％PFF的TCM-199體外成熟液效果最好。
　　 2、卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)的不同時(shí)間對(duì)重構(gòu)胚發(fā)育的影響。設(shè)置三個(gè)培養(yǎng)時(shí)間(37h、40h、43h)培養(yǎng)的卵母細(xì)胞，核移植后的卵裂率分別為65.26％、64.44％、63.33％，三組間沒有顯著差異(P＞0.05);37h成熟的囊胚率17.7

3、2％顯著高于40h和43h的10.33％和8.75％(P＜0.05)，這些結(jié)果表明，卵母細(xì)胞體外成熟37h進(jìn)行核移植為宜。
　　 3、轉(zhuǎn)基因和非轉(zhuǎn)基因豬胎兒成纖維細(xì)胞對(duì)重構(gòu)胚的構(gòu)建和體外發(fā)育的影響。分別用轉(zhuǎn)紅色熒光蛋白基因非轉(zhuǎn)基因的豬胎兒成纖維細(xì)胞做為供核細(xì)胞構(gòu)建重構(gòu)胚的結(jié)果顯示融合率分別為70.34％和、68.50％;卵裂率分別為70.59％和68.98％;囊胚率分別為27.78％和26.65％;兩組間沒有差異(P＞0.05)

4、。這些結(jié)果表明，轉(zhuǎn)紅色熒光蛋白基因豬胎兒成纖維細(xì)胞作為供核細(xì)胞，沒有影響重構(gòu)胚的發(fā)育。
　　 4、兩種不同培養(yǎng)液對(duì)重構(gòu)胚體外發(fā)育的影響。用NCSU-37和PZM-3兩種不同胚胎培養(yǎng)液進(jìn)行重構(gòu)胚的體外培養(yǎng)，結(jié)果顯示，卵裂率分別為63.33％和67.5％;囊胚率分別為15.79％和18.51％;兩組間沒有顯著差異(P＞0.05)。
　　 5、轉(zhuǎn)基因重構(gòu)胚移植試驗(yàn)。用促性腺激素同期發(fā)情的5頭受體母豬進(jìn)行胚胎移植，胚胎移植后一個(gè)