異種體細(xì)胞克隆牦牛胚胎發(fā)育的研究.pdf

1、體細(xì)胞克隆技術(shù)是保護(hù)優(yōu)良品種和瀕危動物最有效而理想的途徑之一。本研究利用黃牛卵母細(xì)胞作為受體胞質(zhì)，黑牦牛細(xì)胞作為核供體，旨在通過對體細(xì)胞和激活方式等方法的改進(jìn)，進(jìn)而優(yōu)化異種體細(xì)胞克隆牦牛胚胎體外發(fā)育的技術(shù)平臺。 利用植塊法和消化法建立雄性和雌性黑牦牛耳成纖維細(xì)胞系，比較了供體細(xì)胞不同性別、不同細(xì)胞周期同期化處理方式及冷凍對異種克隆牦牛胚胎發(fā)育的影響。結(jié)果顯示：雄性供體細(xì)胞的異種克隆牦牛囊胚發(fā)育率顯著高于雌性供體細(xì)胞(56.6％v

2、s.39.5％，P<0.05)，但卵裂率和囊胚細(xì)胞數(shù)無顯著性差異；血清饑餓和接觸抑制提供的供體細(xì)胞對異種克隆牦牛胚胎發(fā)育率和胚胎質(zhì)量的影響沒有明顯差別；供體細(xì)胞冷凍后解凍組的克隆胚胎卵裂率明顯低于新鮮消化組(54.5％vs.78.2％，P<0.05)，但兩組之間的囊胚率和囊胚細(xì)胞數(shù)無顯著性差異。表明供體細(xì)胞的性別對異種克隆牦牛囊胚發(fā)育有影響，而細(xì)胞同期化處理和細(xì)胞冷凍對異種克隆牦牛囊胚發(fā)育影響較小。 研究不同激活方法以及融合到激

3、活間隔時間對牦牛異種體細(xì)胞克隆胚胎發(fā)育的影響。試驗分為四個組，A.化學(xué)激活(CHX)+延遲0.5h；B.化學(xué)激活(CHX)+延遲1h；C.電激活+化學(xué)激活(ECHX)+延遲0.5h；D.電激活+化學(xué)激活(ECHX)+延遲1h。結(jié)果顯示：延遲1h激活卵裂率和囊胚發(fā)育率均高于延遲0.5h激活。電激活輔助化學(xué)激活可以提高異種克隆牦牛胚胎的總細(xì)胞數(shù)和ICMl的比例。延遲1h激活I(lǐng)CM的比例都高于延遲0.5h激活，但無顯著性差異。延遲lh激活聯(lián)合

4、電激活輔助化學(xué)激活可以提高ICM：TN的比例，達(dá)到20.5±7.5％，與正常牛體內(nèi)胚胎的比例接近。試驗結(jié)果說明延遲激活1h和電激活輔助化學(xué)激活可以提高異種克隆牦牛胚胎發(fā)育率和胚胎質(zhì)量，是適合牦牛胚胎發(fā)育的激活方案。 比較了OPS玻璃化冷凍法和程序化冷凍法對異種克隆牦牛胚胎冷凍解凍后胚胎發(fā)育率的影響。OPS法玻璃化冷凍解凍后胚胎存活率達(dá)到81.3％，而程序化冷凍法解凍后胚胎存活率僅為26.7％，試驗結(jié)果表明OPS法玻璃化冷凍更適宜