蓖麻矮化相關(guān)RcDof基因克隆及功能分析.pdf

1、蓖麻(Ricinus communis L.)是世界十大油料作物之一。矮稈蓖麻品種具有單產(chǎn)較高、適合密植和機(jī)械化收獲等優(yōu)點。Dof(DNA-binding with one finger)蛋白是植物特有的一類轉(zhuǎn)錄因子，在植物的生長發(fā)育過程中起重要作用，參與植物矮化的調(diào)控。本課題組在以往的研究中發(fā)現(xiàn)了一個鋅指蛋白RcDof基因，該基因在高矮蓖麻中差異表達(dá)。因此，本研究克隆了RcDof基因，轉(zhuǎn)化“通蓖5號”高稈蓖麻材料，獲得轉(zhuǎn)基因陽性植株，

2、對轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行研究，分析該基因的功能，探討其矮化調(diào)節(jié)機(jī)制，為通過分子手段獲得蓖麻矮化新品種奠定基礎(chǔ)，也為Dof轉(zhuǎn)錄因子對植物矮化的影響研究提供理論依據(jù)。本試驗的研究結(jié)果如下：
　　1、以蓖麻RNA反轉(zhuǎn)錄的cDNA為模板，設(shè)計特異性引物，克隆得到RcDof基因，經(jīng)序列測定后，確認(rèn)該基因全長為924bp。
　　2、利用雙酶切法，將RcDof基因和植物表達(dá)載體pCAMBIA1305.2線性化，經(jīng)連接、轉(zhuǎn)化和鑒定后獲得植物過表達(dá)載

3、體pCAM-RcDof-OE。利用中間載體pHANNIBAL獲得植物抑制表達(dá)載體pCAM-RcDof-RNAi。
　　3、通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化方法，將植物過表達(dá)載體pCAM-RcDof-OE和植物抑制表達(dá)載體pCAM-RcDof-RNAi轉(zhuǎn)入蓖麻子葉節(jié)受體，經(jīng)PCR檢測后，成功獲得轉(zhuǎn)基因蓖麻植株。
　　4、對野生型和轉(zhuǎn)基因蓖麻植株進(jìn)行RcDof基因的轉(zhuǎn)錄水平分析。發(fā)現(xiàn)與野生型蓖麻植株相比，過表達(dá)轉(zhuǎn)基因蓖麻植株RcDof基

4、因轉(zhuǎn)錄水平增加，抑制表達(dá)轉(zhuǎn)基因蓖麻植株RcDof基因轉(zhuǎn)錄水平降低。
　　5、對野生型和轉(zhuǎn)基因蓖麻植株進(jìn)行表型特征分析，觀察莖節(jié)細(xì)胞形態(tài)變化。發(fā)現(xiàn)與野生型蓖麻植株相比，過表達(dá)轉(zhuǎn)基因蓖麻植株株高降低、節(jié)間長度變短、莖節(jié)細(xì)胞面積減小，細(xì)胞數(shù)量增加；抑制表達(dá)轉(zhuǎn)基因蓖麻植株株高增加、節(jié)間長度變長、莖節(jié)細(xì)胞面積增大，細(xì)胞數(shù)量減少。
　　6、利用雙酶切法，將RcDof基因和亞細(xì)胞定位表達(dá)載體pCAMBIA1302進(jìn)行雙酶切，經(jīng)連接、轉(zhuǎn)化和