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文檔簡(jiǎn)介
1、遼寧新品系絨山羊是我國(guó)特有的遺傳物種,其產(chǎn)品絨、肉、皮、毛都具有重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值,因此,對(duì)遼寧新品系絨山羊相關(guān)基因生物學(xué)特性的研究具有重要的意義。
褪黑激素是生物體內(nèi)一種重要的信號(hào)物質(zhì),能夠調(diào)控絨山羊絨毛的生長(zhǎng)。然而,褪黑激素對(duì)遼寧新品系絨山羊相關(guān)基因的影響研究的較少。因此,本文首次以遼寧新品系絨山羊?yàn)檠芯繉?duì)象,探討褪黑激素對(duì)遼寧新品系絨山羊耳成纖維細(xì)胞中核心蛋白聚糖(DCN)、GMP還原酶2(GMPR2)和OCIAD2(卵巢癌免
2、疫反應(yīng)抗原抗體)三個(gè)新基因的表達(dá)影響。濃度分別為0.02g/L,0.2g/L,1g/L的褪黑激素分別作用于遼寧新品系絨山羊耳成纖維細(xì)胞,分別培養(yǎng)24h,48h,72h后對(duì)三個(gè)新基因進(jìn)行熒光定量PCR檢測(cè)。結(jié)果顯示:(1) GMP還原酶2用褪黑激素處理48小時(shí)、72小時(shí)后較Actin相比,三個(gè)濃度的褪黑激素都能使其表達(dá)增加,但濃度為0.2g/L時(shí)效果最顯著(P<0.5)。(2)核心蛋白聚糖用褪黑激素處理48小時(shí)、72小時(shí)后較Actin相比
3、,三個(gè)濃度的褪黑激素都能使其表達(dá)增加,但濃度為1g/L時(shí)效果最顯著(P<0.5)。(3) OCIAD2基因?qū)儆谂c癌癥相關(guān)基因,表達(dá)量較Actin比較低,約為0,這一結(jié)果說(shuō)明該基因在正常細(xì)胞中的表達(dá)量很低,褪黑激素對(duì)其表達(dá)影響不明顯。
運(yùn)用生物信息學(xué)分析和RT-PCR方法對(duì)遼寧新品系絨山羊皮膚細(xì)胞中的UMP/CMP激酶新基因進(jìn)行分析。結(jié)果顯示:(1)信息學(xué)分析得知UMP/CMP激酶基因全長(zhǎng)為1081bp,能夠編碼含有228個(gè)氨基
4、酸的蛋白質(zhì),表現(xiàn)出較高的亮氨酸、甘氨酸、賴氨酸含量以及較低的組氨酸、色氨酸含量。該蛋白含有UMP/CMP激酶蛋白結(jié)構(gòu)域。(2) RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示,UMP/CMP激酶基因特異地表達(dá)于皮膚。
角蛋白關(guān)聯(lián)蛋白被認(rèn)為能夠影響絨山羊絨毛的生長(zhǎng),為了進(jìn)一步研究這類(lèi)基因的生理功能,本文以遼寧新品系絨山羊角蛋白關(guān)聯(lián)蛋白KAP26.1為研究對(duì)象,制備多克隆抗體。結(jié)果顯示將KAP26.1基因插入至PET-32a原核表達(dá)載體后在大腸桿菌中能
5、夠高表達(dá),重組蛋白經(jīng)純化后作為抗原免疫家兔,制備兔抗KAP26.1多克隆抗體,用ELISA的方法檢測(cè)經(jīng)純化得到的多克隆抗體具有高效價(jià)。Wesce(m) blot結(jié)果證明所制備的抗體可以與角蛋白關(guān)聯(lián)蛋白KAP26.1特異性結(jié)合。
以上研究為進(jìn)一步探索遼寧新品系絨山羊種質(zhì)遺傳特性奠定了一定的理論基礎(chǔ)。對(duì)遼寧新品系絨山羊的生物學(xué)遺傳特性的研究,使我們從分子水平加深了對(duì)我國(guó)特有遺傳資源基礎(chǔ)理論的研究,這為進(jìn)一步保護(hù)遺傳基因庫(kù),改良優(yōu)良
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