遼寧新品系絨山羊DCN等基因生物學(xué)特性的研究.pdf

1、遼寧新品系絨山羊是我國(guó)特有的遺傳物種，其產(chǎn)品絨、肉、皮、毛都具有重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值，因此，對(duì)遼寧新品系絨山羊相關(guān)基因生物學(xué)特性的研究具有重要的意義。
　　褪黑激素是生物體內(nèi)一種重要的信號(hào)物質(zhì)，能夠調(diào)控絨山羊絨毛的生長(zhǎng)。然而，褪黑激素對(duì)遼寧新品系絨山羊相關(guān)基因的影響研究的較少。因此，本文首次以遼寧新品系絨山羊?yàn)檠芯繉?duì)象，探討褪黑激素對(duì)遼寧新品系絨山羊耳成纖維細(xì)胞中核心蛋白聚糖(DCN)、GMP還原酶2（GMPR2）和OCIAD2（卵巢癌免

2、疫反應(yīng)抗原抗體）三個(gè)新基因的表達(dá)影響。濃度分別為0.02g/L，0.2g/L，1g/L的褪黑激素分別作用于遼寧新品系絨山羊耳成纖維細(xì)胞，分別培養(yǎng)24h，48h，72h后對(duì)三個(gè)新基因進(jìn)行熒光定量PCR檢測(cè)。結(jié)果顯示:(1) GMP還原酶2用褪黑激素處理48小時(shí)、72小時(shí)后較Actin相比，三個(gè)濃度的褪黑激素都能使其表達(dá)增加，但濃度為0.2g/L時(shí)效果最顯著(P＜0.5)。(2)核心蛋白聚糖用褪黑激素處理48小時(shí)、72小時(shí)后較Actin相比

3、，三個(gè)濃度的褪黑激素都能使其表達(dá)增加，但濃度為1g/L時(shí)效果最顯著(P＜0.5)。(3) OCIAD2基因?qū)儆谂c癌癥相關(guān)基因，表達(dá)量較Actin比較低，約為0，這一結(jié)果說(shuō)明該基因在正常細(xì)胞中的表達(dá)量很低，褪黑激素對(duì)其表達(dá)影響不明顯。
　　運(yùn)用生物信息學(xué)分析和RT-PCR方法對(duì)遼寧新品系絨山羊皮膚細(xì)胞中的UMP/CMP激酶新基因進(jìn)行分析。結(jié)果顯示:(1)信息學(xué)分析得知UMP/CMP激酶基因全長(zhǎng)為1081bp，能夠編碼含有228個(gè)氨基

4、酸的蛋白質(zhì)，表現(xiàn)出較高的亮氨酸、甘氨酸、賴氨酸含量以及較低的組氨酸、色氨酸含量。該蛋白含有UMP/CMP激酶蛋白結(jié)構(gòu)域。(2) RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，UMP/CMP激酶基因特異地表達(dá)于皮膚。
　　角蛋白關(guān)聯(lián)蛋白被認(rèn)為能夠影響絨山羊絨毛的生長(zhǎng)，為了進(jìn)一步研究這類(lèi)基因的生理功能，本文以遼寧新品系絨山羊角蛋白關(guān)聯(lián)蛋白KAP26.1為研究對(duì)象，制備多克隆抗體。結(jié)果顯示將KAP26.1基因插入至PET-32a原核表達(dá)載體后在大腸桿菌中能

5、夠高表達(dá)，重組蛋白經(jīng)純化后作為抗原免疫家兔，制備兔抗KAP26.1多克隆抗體，用ELISA的方法檢測(cè)經(jīng)純化得到的多克隆抗體具有高效價(jià)。Wesce(m) blot結(jié)果證明所制備的抗體可以與角蛋白關(guān)聯(lián)蛋白KAP26.1特異性結(jié)合。
　　以上研究為進(jìn)一步探索遼寧新品系絨山羊種質(zhì)遺傳特性奠定了一定的理論基礎(chǔ)。對(duì)遼寧新品系絨山羊的生物學(xué)遺傳特性的研究，使我們從分子水平加深了對(duì)我國(guó)特有遺傳資源基礎(chǔ)理論的研究，這為進(jìn)一步保護(hù)遺傳基因庫(kù)，改良優(yōu)良