遼寧新品系絨山羊蛋白家族四個基因在皮膚中的表達及分析.pdf

1、遼寧新品系絨山羊是我國嚴禁流向境外的珍貴遺傳資源,其單只產(chǎn)絨量居全國首位。羊毛、羊絨的角蛋白組成和含量與其纖維的品質(zhì)有密切關系,由于絨和毛的角蛋白組分是相似的,但二者的品質(zhì)卻相差極大,因此從毛囊中各種角蛋白家族及其關聯(lián)蛋白家族基因的表達入手,找出其中的差異,是實現(xiàn)控制絨毛纖維品質(zhì)的關鍵。
　　 遼寧新品系絨山羊絨毛纖維的形成主要與微絲角蛋白(KIFs)和微絲角蛋白關聯(lián)蛋白(KAPs)的表達有關。在本實驗中,在毛囊興盛期利用遼寧新

2、品系絨山羊皮膚組織構建cDNA文庫,測序得到1986條EST序列,經(jīng)拼接得到243條contigs和883條singles。利用Blastx進行功能分類,結果顯示,,其中有14類編碼絨毛結構蛋白的基因。隨后通過兩個方面進行研究:
　　 第一,高甘氨酸/酪氨酸家族基因KAP6-1.2、KAP6-1.4、KAP8.1基因在皮膚中的表達。(1)通過Real rime PCR研究三個基因在遼寧新品系絨山羊毛囊興盛期初、次級毛囊中的表達差

3、異,結果顯示KAP6-1.4在次級毛囊中的表達量約為初級毛囊的1.5倍,差異明顯(P<0.05),KAP6-1.2、KAP8.1在初、次級毛囊中的表達量差異不明顯。(2)利用半定量RT-PCR檢測上述三個基因在各上皮組織中的表達,結果證明,三個基因特異地表達于皮膚。(3)利用原位雜交技術對KAP6-1.2、KAP6-1.4、KAP8.1基因在遼寧新品系絨山羊皮膚初、次級毛囊中的表達進行定位分析,結果顯示上述三個基因均在次級毛囊的皮質(zhì)層中

4、部或上部表達。其中,KAP-1.2基因在初級毛囊中存在不對稱表達,而KAP8.1基因存在對稱和不對稱表達,且KAP8.1還在毛球彎曲處檢測到微弱的表達信號。三個基因均在遼寧新品系絨山羊初、次級毛囊的內(nèi)根鞘中表達,KAP8.1還在初級毛囊中的髓質(zhì)層中檢測到表達信號。通過以上結果,可以推測KAP6-1.2、KAP6-1.4、KAP8.1基因可能與絨毛纖維直徑以及遼寧新品系絨山羊絨毛品質(zhì)相關。
　　 第二,在1986條EST序列中發(fā)現(xiàn)

5、了一條全長eDNA序列,與其他已知序列表現(xiàn)出相似性,稱為角蛋白26(K26)。(1)生物信息分析結果顯示,K26基因能夠編碼含有468個氨基酸的蛋白質(zhì),K26蛋白表現(xiàn)出較高的組氨酸、賴氨酸、甲硫氨酸含量及較低的精氨酸、異亮氨酸、半胱氨酸含量,此外,它還具有一個甘氨酸富集區(qū)域。二級結構預測顯示,K26含有較高比例的α-螺旋結構(55.98％)。進化分析顯示K26與K25、K27的關系較近。(2)通過RT-PCR結構發(fā)現(xiàn)K26特異地表達于皮