抗除草劑和多價抗蟲基因導入水稻光溫敏核不育系的研究.pdf

1、雜草和害蟲的危害是導致水稻減產的重要原因，每年由此給全球水稻生產造成的損失高達數(shù)百億美元。為了提高雜交水稻的抗蟲性、方便直播制種和除草，避免人們對抗生素篩選標記的安全性顧慮，我們開展了抗除草劑、抗蟲植物表達載體的構建和水稻光溫敏核不育系的轉化研究。抗除草劑、抗蟲光溫敏核不育系水稻培育成功，將有望在抗除草劑和抗蟲雜交水稻培育、雜交水稻直播栽培和草害防治、雜交稻機械化制種中發(fā)揮重要作用。 本文構建了包含抗除草劑基因Epsps和3個抗

2、蟲基因(馬鈴薯蛋白酶抑制劑基因Pin-Ⅱ、蘇云金桿菌毒蛋白基因Bt cryl(A)及雪花蓮外源凝集素基因(GNA)的植物表達載體。其中，除草劑基因Epsps不僅在實驗中作為篩選標記基因方便進行篩選，而且可以使作物獲得除草劑抗性而方便除草、直播和機械化制種。 基因槍法和農桿菌介導轉化法將連鎖在一起的4個基因轉化水稻光溫敏核不育系7001S。通過基因槍轉化法轟擊1160塊的愈傷組織得到167株再生植株，轉化率17.4％。通過農桿菌介

3、導轉化法侵染270塊的愈傷組織，獲得6株再生植株，轉化率2.2％。轉基因再生植株的分子生物學鑒定表明，抗除草劑基因Epsps和抗蟲基因已經整合到水稻基因組中，其拷貝數(shù)為1-2個。除出只有1～3個基因檢出的植株，選出81個含有4個基因的轉基因植株。部份植株中只含其中1～3個基因，可能是由于基因槍轉化中部分片段發(fā)生丟失造成的。利用除草劑草甘膦處理含4個基因的轉基因植株，它們表現(xiàn)出對草甘膦具有不同的抗性，推測是由于抗除草劑基因在不同個體中表達