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文檔簡介
1、在前期工作中，本研究室構(gòu)建了在紫云英根瘤中增強表達的cDNA文庫，從文庫中篩選獲得若干根瘤特異表達的紫云英基因。其中編碼轉(zhuǎn)脂質(zhì)蛋白(LTP)的基因AsE246經(jīng)進一步研究表明其作用與共生固氮密切相關(guān)。
利用酵母雙雜交技術(shù)，我們篩選獲得了與AsE246相互作用的候選靶蛋白基因AsDJL1的部分結(jié)構(gòu)域。AsDJL1是DnaJ-like的同源基因，DnaJ蛋白是分子伴侶Hsp70蛋白的輔助蛋白，具有多種生物學(xué)功能，能夠激活A(yù)TPas
2、e的活性，幫助蛋白折疊和進一步加工，增強生物抗性，使細胞膜免受重金屬傷害等。
本課題對AsDJL1在與LTP基因AsE246的互作鑒定及其在紫云英共生固氮中的功能展開研究。首先利用cDNA末端快速擴增(RACE)方法獲得AsDJL1基因盼全長，通過生物信息方法分析了該基因的功能結(jié)構(gòu)域，通過構(gòu)建系列截短突變體，在酵母雙雜交體系中驗證了兩個目標蛋白的相互作用，確定了其互作的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)域。采用pull-down實驗技術(shù)，證實了AsDJ
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