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1、中國農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文水楊酸誘導(dǎo)性啟動子的克隆及其在轉(zhuǎn)基因煙草中的表達(dá)姓名:任海波申請學(xué)位級別:碩士專業(yè):生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師:肖興國2002.6.1CloningandExpressioninTransgenicTobaccoofSalicylicAcidInduciblePromoterAbstractInfectionoftobaccowithtobaccomosaicvirus(TMV)resultsinahypers
2、ensitiveresponse(H]R)andleadstosystemicacquiredresistance(SAR)intheplantsTheinductionofSARiSmediatedbysalicylicacid(SA)andiSaccompaniedbymeinducedexpressionofanumberofgenesincludingpathogenesisrelated(PR)genePR1aOffallto
3、baccoPRgenes,PR—la’SexpressionismosthighlyindueedbyTMVandSAtreatmentTherefore,thepromoterofPR—laiSinduciblebysAInthisstudyapmmotcrfragmentof09kbwasobtainedfromtobaccogenomicDNAbyPolymeraseChainReaction(PCR)withthepdmersd
4、esignedaccordingtothePRlapromotersequencereposedinGenbankTheamplifiedfragmentwasclonedintopGEMTvectorandthensequencedSequenceanalysisindicatedthattheclonedsequencewas900bplongandhad99%ofhomologyto也eknownpromotersequenceo
5、fPRJ口ItStranscriptionstartsite,1:f蛆Aboxandconsensussequence‘‘TGAC”conservedinthePRgeneswereidenticaltothoseofPR—ja。InordertostudytheSAindueiblecapacityoftheclonedpromoteracodingsequenceofG【心(pglucurouidase)genewasfusedto
6、itdownstream,andthischimericgenewasclonedintoapBinl9basedplantexpressionvectorcarryingNPTIIgeneasaselectivemarkenThisvectorWasintroducedintotobaccoceilsbyAgrobacleriumtumefaciensmediatedleafdisktransformationandKanresist
7、antplantswereregeneratedSouthernblottinganalysisoftheKanresistantplantsshowedthattheforeigngenesWereintegratedintothegenomeofthetmnsgenietobaccoThechimericgenePRJ口GUSexpressedstronglyintheleavestreated、vitllSAinalltransg
8、eniclinestested,butdidnotexpressorveryweaklyexpressedintheleavestreatedwithwaterbutwithoutSAinsomeoftransgeniclines111echimericGUSgeneexpressedalSOintheentirestems。butnotintherootsoftransgeniclinesofwhichtheleavesweretre
9、atedwithSA,whilewithoutSAinduction,neitherstemnorrootWasGUStrainedIntheuntransformedcontrolplants,nopartswereGUSpositiveTheresultsdescribedabovedemonstratethatthepromoterclonedinthestudyiSSAinduciblepromoterandthispromot
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