簇毛麥染色體分子標(biāo)記的篩選及其高分子量谷蛋白亞基基因的克隆.pdf

1、中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文簇毛麥染色體分子標(biāo)記的篩選及其高分子量谷蛋白亞基基因的克隆姓名：劉守斌申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：作物遺傳育種指導(dǎo)教師：劉廣田2002.6.1分別為110bp和190bp的片段(即Xg珊498／110和xg哪498／190)，這兩個(gè)片段僅在簇毛麥、中國(guó)春一簇毛麥1Ha附加系中出現(xiàn)，其余2Ha、4Ha、5Ha、6Ha、7Ha附加系、3V代換系和中國(guó)春中都缺少這兩個(gè)片段。迸一步研究表明，這兩個(gè)片段與簇毛麥的居群無關(guān)。因此

2、，xg釉498／“O和x踟n498／190為簇毛麥lV染色體所特有，可以用來快速跟蹤導(dǎo)入普通小麥背景中的簇毛麥的lV染色體。4利用SDS—PAGE技術(shù)，對(duì)中國(guó)春、錢尼、簇毛麥、6個(gè)中國(guó)春一簇毛麥二體附加系、普通小麥～簇毛麥3V異代換系、進(jìn)行哪谷蛋白的亞基組成分析，進(jìn)一步確定簇毛麥Ⅲ1】『谷蛋白編碼基因位于1v染色體。f根據(jù)已發(fā)表的普通小麥刪1】『谷蛋白亞基編碼基因的核苷酸序列進(jìn)行同源性比較的結(jié)果，設(shè)計(jì)了3對(duì)分別擴(kuò)增普通小麥x一型亞基基因

3、、y一型亞基基因以及所有nflv—GS基因的特異引物。經(jīng)過對(duì)簇毛麥蹦w_Gs編碼基因進(jìn)行擴(kuò)增，發(fā)現(xiàn)三對(duì)引物都能鑒別簇毛麥刪w—Gs編碼基因，并從分子水平上把簇毛麥mlW～GS編碼基因定位于簇毛麥1V染色體上。I5從三個(gè)不同來源的簇毛麥中克隆了lVa、lVb、1Vc等三個(gè)簇毛麥高分子量谷蛋白亞基編碼基因。【經(jīng)過全序列測(cè)定和同源性比較，發(fā)現(xiàn)它們與普通小麥部分已知y一型亞基在N一端的一致性明顯高于部分已知x一亞基的N一端一致性，但c～端序列的

4、比較結(jié)果卻又顯示它們與部分已知x型皿基的一致性明顯高于y一型亞基。卜端共有105個(gè)氨基酸，其中包括5個(gè)半胱氨酸殘基。在重復(fù)區(qū)沒有發(fā)現(xiàn)x型亞基所特有的三肽(GQQ)類型。1vc因在編碼區(qū)出現(xiàn)了兩個(gè)終止予而可能為一個(gè)假基因。將1Va、1Vb、lVc編碼的亞基和普通小麥高分子量谷蛋白亞基的N一端和C一端序列進(jìn)行聚類分析表明，1Va、lVb和lVcN一端與y一型高分子量谷蛋白亞基的N一端聚類在一起，而C一端卻與x一型高分子量谷蛋白亞基的c一端聚

5、類在一起。但無論在N一端和C一端，簇毛麥V基因組編碼的亞基與A、B、D和R基因組編碼的亞基都不在同一支。說明簇毛麥V基因組與A、B、D和R基因組親緣關(guān)系相對(duì)較遠(yuǎn)，可能V組染色體在A、B、D和R基因組分化之前就已經(jīng)存在。丈6根據(jù)所克隆的三個(gè)簇毛麥H刪_Gs基因的核苷酸序列和已發(fā)表的普通小麥HMl】|r—Gs基因的核苷酸序列，經(jīng)過同源性比較后設(shè)計(jì)了兩對(duì)簇毛麥HMw～Gs編碼基因的特異性引物。悃這兩對(duì)引物分別對(duì)六個(gè)不同來源簇毛麥進(jìn)行PcR擴(kuò)增