小麥高分子量谷蛋白亞基分離純化方法研究.pdf

1、小麥(Trticumaestivum)是我國(guó)乃至世界的主要糧食作物之一，其種植面積約占谷物種植面積的30％左右。小麥面粉可以加工成各種不同的食品，是人類植物蛋白質(zhì)的重要來(lái)源，因此，對(duì)小麥的研究一直是人們關(guān)注的熱點(diǎn)。 小麥種子中貯藏了大量的淀粉和蛋白質(zhì)，小麥種子蛋白約占谷物蛋白質(zhì)的80.4％，大量研究表明，小麥的營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)和加工品質(zhì)都與種子蛋白的含量和組成密切相關(guān)，因此對(duì)小麥種子貯藏蛋白的研究則倍受關(guān)注。高分子量麥谷蛋白亞基(Hig

2、hmolecularweightgluteninsubunits，HMW-GS)是小麥種子中的一類重要的貯藏蛋白，對(duì)小麥加工品質(zhì)性狀具有決定性作用，特定亞基可以明顯改善小麥的品質(zhì)。而單一亞基的分離純化與功能檢測(cè)則是小麥品質(zhì)育種工作的核心基礎(chǔ)，具有非常重要意義。 小麥HMW-GS的分離純化方法較多，如SDS-PAGE、RP-HPLC、AC以及近來(lái)所興起的HPCE等，各種方法都存在一定的優(yōu)缺點(diǎn)，有適用范圍的限定。探索適用范圍較廣的H

3、MW-GSs的快速分離純化方法則非常必要。本實(shí)驗(yàn)以Glu-1位點(diǎn)HMW-GS組成不同的四種小麥(小偃6號(hào)、小偃503、預(yù)展2000和濟(jì)南17)面粉為研究材料，探索并建立了小麥HMW-GS的快速分離純化方法，實(shí)驗(yàn)取得的主要研究結(jié)果如下： 1.利用ResourceTMPhe為色譜柱，摸索了FPLC一步分離純化HMW-GS的方法。其最佳洗脫條件為：以含有4M脲和0.25M(NH4)2SO4的0.05MTris-HCl(pH8.0)Bu

4、fferA作為平衡液，以含有4M脲的0.05MTris-HCl(pH8.0)BufferB作為洗脫液，以0.5ml/min流速進(jìn)行非線性梯度洗脫，可以純化到部分HMW-GS。HMW-GSs的脫順序?yàn)椋簓-亞基、1Dx亞基、1Bx亞基和1Ax亞基。 2.利用所建立的FPLC方法對(duì)所選材料的HMW-GSs進(jìn)行了分離純化，從小偃6中純化到了1Dx2亞基和1Bx14亞基；從小偃503中純化到1Bx7亞基和1Dx2亞基；從預(yù)展2000中純

5、化到1Bx13亞基和1Dx4亞基；從濟(jì)南17中純化到1Bx7亞基和1Dx5亞基。 3.用所建立方法可以分離純化任一基因型小麥中的1Bx-和1Dx型亞基；同時(shí)還可分離到純的y-型亞基的混合物。 4.建立了利用ReactionRed-120親和層析分離純化小偃6號(hào)中HMW-GS1Bx14亞基的方法。其最佳的洗脫條件為：0.05MTris-HCL+4M脲(pH8.0)緩沖體系，SDS濃度為0.04％。 這些研究結(jié)果為單