26766.文昌魚amphibpi分子與補(bǔ)體系統(tǒng)的功能和進(jìn)化研究

1、中山大學(xué)博士學(xué)位論文文昌魚amphiBPI分子與補(bǔ)體系統(tǒng)的功能和進(jìn)化研究姓名：余英才申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：徐安龍20100608中山大學(xué)博士學(xué)位論文它們是脊椎動(dòng)物Clq、MBL和ficolin的祖先序列，而數(shù)量的眾多可能為基因功能進(jìn)化作儲(chǔ)備。分析還發(fā)現(xiàn)4個(gè)因子B／C2的genemodel，說明文昌魚的旁路激活途徑也很強(qiáng)大。此外還在基因組中分析發(fā)現(xiàn)大量的補(bǔ)體功能相關(guān)的結(jié)構(gòu)域模塊，如VWA、LDLa、MACP

2、F、CUB、CCP、SP和FIMAC等，說明文昌魚已經(jīng)具備比較完整的補(bǔ)體系統(tǒng)。3)根據(jù)MBL和ficolin特異性識(shí)別GlcNAc的特性，我們利用GlcNAeagarosecolumn從文昌魚體液中提取純化得到了特異蛋白，并制備高效特異的多克隆抗體進(jìn)免疫組化分析。4)從文昌魚中克隆得到MASPl／3、ficolin、C3、C6和因子B等分子，并進(jìn)行功能相關(guān)實(shí)驗(yàn)。成體切片原位雜交顯示MASPl／3、C3和C6等分子在咽鰓裂、肝盲囊、消化道

3、和卵巢等組織表達(dá)水平較高，說明這些分子均可能與免疫反應(yīng)相關(guān)。GSTpulldown實(shí)驗(yàn)證明AmphiClql能與MASP相互作用，并且這種結(jié)合不需要Ca2的參與，推測(cè)AmphiClql參與補(bǔ)體系統(tǒng)的凝集素途徑。C3和C6與細(xì)菌的結(jié)合實(shí)驗(yàn)表明它們與大部分細(xì)菌有結(jié)合作用，具體的機(jī)制還不是很清楚。經(jīng)過抗菌篩選，并未發(fā)現(xiàn)文昌魚補(bǔ)體系統(tǒng)的殺菌作用，攻膜復(fù)合體的存在與否有待進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)去驗(yàn)證。關(guān)鍵詞：文昌魚補(bǔ)體系統(tǒng)殺菌／滲透性增高蛋白脂多糖結(jié)合蛋白